一种钩吻减毒存效的配伍组合物及其配伍方法

技术领域

本发明涉及钩吻减毒存效的配伍研究，特别涉及一种钩吻减毒存效的配伍组合物及其配伍方法。

背景技术

钩吻，又名断肠草、山砒霜、野葛等，为马钱科胡蔓藤属植物胡蔓藤Gelsemiumelegans Benth.的全株，其味苦、辛，性温，有大毒，具有祛风攻毒、散结消肿、止痛的功效，主治湿疹、痈肿、体癣、跌打损伤、风湿痹痛、神经痛等。现代药理实验也表明其对肿瘤、疼痛、炎症、免疫、皮肤病等的治疗发挥着重要作用。

由于钩吻有剧毒，毒性成分主要为吲哚类生物碱，治疗量和中毒量非常接近，安全指数小，不乏钩吻中毒的临床报道。但是，吲哚类生物碱也有着独特的生物活性——抗肿瘤、镇痛、影响免疫功能等作用。面对其药效成分亦是毒性成分，如何减少钩吻的毒性，同时保持其药理活性，对于提高钩吻临床应用的安全性具有十分重要的意义。

目前，对钩吻的研究主要集中在生物学、化学、药理及毒理等方面，而对钩吻的减毒存效的相关研究鲜见报道，未见配伍对其致毒成分及致毒机制的研究。鉴于钩吻有剧毒，因此，本领域需要开发钩吻减毒存效的配伍组合物，在保证钩吻镇痛作用的基础上，大大降低其毒性。

发明内容

为解决上述传统润滑油所存在的问题，需要提供一种可保证钩吻镇痛作用，同时降低其毒性的钩吻减毒存效的配伍组合物及其配伍方法。

为此，发明人提供了如下技术方案：

一种钩吻减毒存效的配伍组合物，所述组合物为钩吻与减毒存效组分按重量份数比1:5～50配伍，所述减毒存效组分为下列中的一种：玉叶金花、羊血、或鱼腥草和薄荷的混合物。

本发明将钩吻与减毒存效组分配伍后，在明显降低钩吻毒性的情况下，还可保证钩吻的镇痛功能。

优选的，所述减毒存效组分为玉叶金花。玉叶金花与钩吻配伍，达到的减毒存效效果最好。

进一步，所述钩吻在进行配伍前先经预处理，所述预处理操作为：先将钩吻粉碎，并经溶剂A回流提取得到钩吻提取液；所述溶剂A为水或30％-90％的乙醇。其中，所述溶剂A优选为90％的乙醇。本发明采用90％的乙醇提取的钩吻提取液，其毒性最强。

进一步，所述钩吻在进行配伍前经预处理操作后，还进行萃取操作，所述萃取操作为：将钩吻提取液经溶剂B萃取，再除去溶剂B得到钩吻萃取液；所述溶剂B为下列中的一种：石油醚、二氯甲烷或乙酸乙酯。所述溶剂B优选为二氯甲烷。本发明有二氯甲烷萃取得到的钩吻萃取液，其毒性相对其他溶剂的萃取液，毒性最强。

进一步，所述减毒存效组分为玉叶金花、或鱼腥草和薄荷的混合物时，在进行配伍前先经预处理，所述预处理操作为：先将减毒存效组分粉碎，并经溶剂C回流提取得到减毒存效组分提取液；所述溶剂C均为水或30％-90％的乙醇。所述溶剂C优选为90％的乙醇。

进一步，所述减毒存效组分在进行配伍前经预处理操作后，还进行萃取操作，所述萃取操作为：将减毒存效组分提取液经溶剂D萃取，得到减毒存效组分萃取液或水相溶液，所述溶剂D为下列中的一种或两种以上：石油醚、二氯甲烷或乙酸乙酯。

本发明还公开了一种钩吻减毒存效的配伍方法，所述方法为：

将钩吻与减毒存效组分按重量份数比1:5～50进行配伍，得到钩吻减毒存效的配伍组合物；所述减毒存效组分为下列中的一种：玉叶金花、羊血、或鱼腥草和薄荷的混合物。

进一步，所述钩吻在进行配伍前先进行预处理操作，所述预处理操作为：先将钩吻粉碎，并经溶剂A回流提取得到钩吻提取液；所述溶剂A为水或30％-90％的乙醇；所述减毒存效组分为玉叶金花、或鱼腥草和薄荷的混合物时，在进行配伍前先经预处理，所述预处理操作为：先将减毒存效组分粉碎，并经溶剂C回流提取得到减毒存效组分提取液；所述溶剂C均为水或30％-90％的乙醇。所述溶剂C优选为90％的乙醇。所述减毒存效组分为羊血时，则可直接与钩吻提取液进行混合。

进一步，所述钩吻在进行配伍前经预处理操作后，还进行萃取操作，所述萃取操作为：将钩吻提取液经溶剂B萃取，再除去溶剂B得到钩吻萃取液；所述溶剂B下列中的一种：石油醚、二氯甲烷或乙酸乙酯；所述减毒存效组分在进行配伍前经预处理操作后，还进行萃取操作，所述萃取操作为：将减毒存效组分提取液经溶剂D萃取，得到减毒存效组分萃取液或水相溶液，所述溶剂D下列中的一种或两种以上：石油醚、二氯甲烷或乙酸乙酯。所述溶剂B优选为二氯甲烷。

优选的，本发明的钩吻减毒存效的配伍方法，其包括以下步骤：

1)、钩吻预处理：先将钩吻粉碎，并经溶剂A回流提取得到钩吻提取液；所述溶剂A为90％的乙醇；

2)、钩吻萃取：将钩吻提取液经溶剂B萃取，除去溶剂B得到钩吻萃取液；所述溶剂B为二氯甲烷；

3)、玉叶金花预处理：先将玉叶金花粉碎，并经溶剂C回流提取得到玉叶金花提取液；所述溶剂C为90％的乙醇；

4)、玉叶金花萃取：将玉叶金花提取液经溶剂D萃取，弃去萃取液，得到玉叶金花水相溶液；所述溶剂D为下列中的一种或两种以上：石油醚、二氯甲烷或乙酸乙酯；

5)、将钩吻萃取液和玉叶金花水相溶液按重量份数1:40进行配伍，得到钩吻减毒存效的配伍组合物。

本发明中，钩吻配伍玉叶金花、钩吻配伍鱼腥草和薄荷均可在一定程度上实现钩吻减毒功能，尤其为钩吻配伍玉叶金花效果更好。同时，钩吻配伍减毒组分还可对小鼠起到镇痛作用。所以本发明的钩吻的配伍组合物明显具有减毒存效的效果。

附图说明下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明：

图1为钩吻二氯甲烷萃取液配伍玉叶金花水相溶液前后对小鼠扭体次数的影响图；

图2为钩吻二氯甲烷萃取液配伍玉叶金花水相溶液前后对小鼠镇痛率的影响图。

具体实施方式

为详细说明本发明的技术内容、构造特征、所实现目的及效果，以下结合实施方式详予说明。

本发明公开一种钩吻减毒存效的配伍组合物，所述组合物为钩吻与减毒存效组分按重量份数比1:5～50配伍，所述减毒存效组分为下列中的一种：玉叶金花、羊血、或鱼腥草和薄荷的混合物。

本发明还公开一种钩吻减毒存效的配伍方法，所述方法为：

将钩吻与减毒存效组分按重量份数比1:5～50进行配伍，得到钩吻减毒存效的配伍组合物；所述减毒存效组分为下列中的一种：玉叶金花、羊血、或鱼腥草和薄荷的混合物。

其中，所述钩吻在配伍前，先进行预处理操作，所述预处理操作为：先将钩吻粉碎，并经溶剂A回流提取得到钩吻提取液；所述溶剂A为水或30％-90％的乙醇；所述减毒存效组分的预处理方法为：先将减毒存效组分粉碎，并经溶剂C回流提取得到减毒存效组分提取液；所述溶剂C为水或30％-90％的乙醇。

本发明中，当减毒存效组分为玉叶金花时，钩吻可与玉叶金花混合后再一起进行提取操作，也可以钩吻和玉叶金花分别进行提取操作后，再将提取液进行混合。当减毒存效组分为鱼腥草和薄荷的混合物时，其操作与玉叶金花类似。其中，鱼腥草和薄荷按1:1重量比进行混合。当减毒存效组分为羊血时，则钩吻需先进行提取后，再将钩吻提取液与羊血进行混合。

根据采用不同的溶剂A，钩吻的预处理方法见实施例1-实施例4。

实施例1

取钩吻生药粉末10.0g，置于150mL圆底烧瓶中，加50ml的水浸泡0.5h后回流提取1h，提取2次，合并上层清液并减压回收浓缩，然后再用蒸馏水溶解转移并定容至10mL，即得钩吻提取液1g·ml^-1(以钩吻生药量计)。

实施例2

取钩吻生药粉末10.0g，置于150mL圆底烧瓶中，加50ml的30％的乙醇浸泡0.5h后回流提取1h，提取2次，合并上层清液并减压回收浓缩，然后再用蒸馏水溶解转移并定容至10mL，即得钩吻提取液1g·ml^-1(以钩吻生药量计)。

实施例3和实施例4

实施例3和实施例4的操作、用量与实施例2相同，其中更换提取溶剂，实施例3中，提取溶剂为60％的乙醇；实施例4中，提取溶剂为90％的乙醇。

根据实施例1-实施例4制备的钩吻提取液，进行钩吻提取液的毒性实验，具体操作如下：

取50只KM种小鼠随机分成5组(空白对照组、水提物组，30％醇提物组，60％醇提物组和90％醇提物组)，每组10只，苦味酸标记，试验前禁食不禁水12h，后一次性灌胃按0.6g·kg^-1(以钩吻生药量计)给予相应的药物，空白对照组给予同体积的生理盐水。给药后立即观察记录小鼠24h内的中毒体征和死亡情况。毒性实验结果见表1。

小鼠给予实施例1到实施例4提取的钩吻提取液后，依次出现安静、发抖、四肢无力及运动失调；进而转向兴奋状态，叩牙频繁，并伴有痉挛；到后期痉挛强度更大，继而间歇性的惊厥、跳跃，随即出现全身性剧烈的强直性惊厥，最后呼吸衰竭而死亡。给药后0.5～2h为死亡高峰期，死亡现象均发生在24h内。根据表1，急性毒性试验结果显示：实施例1的钩吻水提液未见死亡，毒性最小；但随着乙醇浓度的增加，钩吻醇取液的毒性逐渐增大，实施例4中90％钩吻醇提液小鼠死亡率100％，毒性最大。所以，本发明优选90％乙醇作为钩吻的提取溶剂。

表1实施例1到实施例4的钩吻提取液的毒性实验

注a：剂量均以钩吻生药量计，下同。

以减毒存效组分为玉叶金花为例，根据采用不同的溶剂C，玉叶金花的预处理方法见实施例5-实施例8。当减毒存效组分为鱼腥草和薄荷的混合物时，其提取操作与玉叶金花类似，鱼腥草和薄荷按1:1重量比进行混合。

实施例5

取玉叶金花生药50g，置于500ml圆底烧瓶中，加150ml的水浸泡0.5h后回流提取1h，提取2次，合并上层清液并减压回收浓缩，用蒸馏水溶解转移并定容至50ml，即得玉叶金花提取液1g·ml^-1(以玉叶金花生药量计)。

实施例6

取玉叶金花生药50g，置于500ml圆底烧瓶中，加150ml 30％的乙醇浸泡0.5h后回流提取1h，提取2次，合并上清液并减压回收浓缩，用蒸馏水溶解转移并定容至50ml，即得玉叶金花提取液1g·ml^-1(以玉叶金花生药量计)。

实施例7和实施例8

实施例7和实施例8的操作、用量与实施例5或6相同，其中更换提取溶剂，实施例7中，提取溶剂为60％的乙醇；实施例8中，提取溶剂为90％的乙醇。

为了检验钩吻提取液和与玉叶金花提取液最佳配比的减毒效果，进行以下钩吻提取液和与玉叶金花提取液不同配比的实施例。

实施例9

将实施例4制备的钩吻提取液与实施例8制备的玉叶金花提取液按重量份数1:5配伍。

实施例10

将实施例4制备的钩吻提取液与实施例8制备的玉叶金花提取液按重量份数1:10配伍。

实施例11

将实施例4制备的钩吻提取液与实施例8制备的玉叶金花提取液按重量份数1:20配伍。

实施例12

将实施例4制备的钩吻提取液与实施例8制备的玉叶金花提取液按重量份数1:30配伍。

实施例13

将实施例4制备的钩吻提取液与实施例8制备的玉叶金花提取液按重量份数1:35配伍。

实施例14

将实施例4制备的钩吻提取液与实施例8制备的玉叶金花提取液按重量份数1:40配伍。

实施例15

将实施例4制备的钩吻提取液与实施例8制备的玉叶金花提取液按重量份数1:50配伍。

在实际操作中，根据需要，完全可以将钩吻生药与玉叶金花生药先按需要的重量份数配伍后，然后用溶剂A或溶剂C回流提取，再减压回收浓缩，然后再用蒸馏水溶解转移并定容，得到钩吻与玉叶金花配伍的提取液。

将实施例9至实施例15的钩吻提取液与玉叶金花提取液按不同重量份数配伍的组合物，进行急性毒性试验，具体操作如下：

取90只KM种小鼠称重后随机分成9组：空白对照组、钩吻提取液组，实施例9至实施例15钩吻提取液与玉叶金花提取液不同重量份数配比组(1:5、1:10、1:20、1:30、1:35、1:40、1:50)，每组10只，苦味酸标记，试验前禁食不禁水12h，后一次性按0.8g.kg^-1灌胃给药(均以钩吻生药量计)，空白对照组给予同体积的生理盐水。给药后立即观察记录各组小鼠24h内的中毒体征和死亡情况，具体结果见表2。

由表2及试验表明，单独用钩吻提取液组剂量为0.8g·kg^-1小鼠死亡率为100％，钩吻提取液与玉叶金花提取液不同重量份数配比组中，随着玉叶金花提取液重量份数的增加，小鼠死亡率下降。当钩吻提取液与玉叶金花提取液重量份数比为1:40以上时，小鼠死亡率不再降低。所以实施例14钩吻提取液与玉叶金花提取液重量份数比为1:40为最佳配比。

表2钩吻提取液与玉叶金花提取液不同重量份数比急性毒性试验

注：钩：玉为“钩吻提取液重量份数：玉叶金花提取液重量份数”的简写。

对钩吻提取液与玉叶金花提取液最优配比进行急性毒性验证试验，具体操作如下：

取50只KM种小鼠称重后随机分成5组：空白对照组、单独用钩吻提取液组，实施例14钩吻提取液与玉叶金花提取液最优重量份数配比1:40组(重复3组)，每组10只，苦味酸标记，试验前禁食不禁水12h，后一次性按0.8g.kg^-1灌胃给药(均以钩吻生药量计)，空白对照组给予同体积的生理盐水。给药后立即观察记录各组小鼠24h内的中毒体征和死亡情况。具体结果见表3。

表3钩吻提取液与玉叶金花提取液最优配比的急性毒性验证试验

注：钩：玉为钩吻提取液重量份数：玉叶金花提取液重量份数的简写。

由表3可知，采用实施例14钩吻提取液与玉叶金花提取液最优配比1:40组进行急性毒性试验，验证小鼠的平均死亡率为23.33±5.78％。在浓度相同的条件下，钩吻提取液与玉叶金花提取液按1:40的重量份数进行配伍，其减毒存效效果最佳。

所述钩吻在进行配伍前经预处理操作后，还进行萃取操作，所述萃取操作为：将钩吻提取液经溶剂B萃取，再除去溶剂B得到钩吻萃取液；所述溶剂B下列中的一种：石油醚、二氯甲烷或乙酸乙酯。本发明中，分别用多种溶剂对钩吻提取物进行萃取，从而找出钩吻最佳毒性成分。

实施例16

将实施例4得到的钩吻提取液经石油醚萃取，萃取3次，合并石油醚萃取液，减压回收浓缩即得钩吻石油醚萃取液。

实施例17

将实施例4得到的钩吻提取液经二氯甲烷萃取，萃取3次，合并二氯甲烷萃取液，减压回收浓缩即得钩吻二氯甲烷萃取液。

实施例18

将实施例4得到的钩吻提取液经乙酸乙酯萃取，萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收浓缩即得钩吻乙酸乙酯萃取液。

实施例19

将实施例4得到的钩吻提取液依次经石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取，每种溶剂均萃取3次，弃去萃取液，收集水相，减压回收浓缩即得钩吻水相溶液。具体操作为：钩吻提取液先经石油醚萃取，弃去石油醚萃取液，收集水相；然后石油醚萃取后的水相溶液再经二氯甲烷萃取，弃去二氯甲烷萃取液，收集水相；二氯甲烷萃取后的水相溶液再经乙酸乙酯萃取，弃去乙酸乙酯萃取液，收集水相，减压回收浓缩即得钩吻水相溶液。

将实施例16至实施例19的各钩吻萃取液进行急毒试验，取60只KM种小鼠称重后随机分成6组：分别设为空白对照组、钩吻提取液对照组、钩吻石油醚萃取液组、钩吻二氯甲烷萃取液组、钩吻醋酸乙酯萃取液组、钩吻水相溶液组，苦味酸标记，试验前禁食不禁水12h，后一次性按给药体积0.01ml·g^-1灌胃给药，空白对照组给予同体积的生理盐水。给药后立即观察记录各组小鼠24h内的中毒体征和死亡情况，具体结果见表4。

表4钩吻最佳萃取溶剂的确定

由表4可知，钩吻90％醇提液，经三种溶剂萃取得到的萃取液及水相溶液(石油醚萃取液、二氯甲烷萃取液、醋酸乙酯萃取液、水相溶液)的小鼠急性毒性试验结果表明：实施例17钩吻二氯甲烷萃取液小鼠死亡率为100％，而钩吻石油醚萃取液、钩吻醋酸乙酯萃取液、钩吻水相溶液均未出现死亡(见表4)。该实验结果表明实施例17钩吻二氯甲烷萃取液为钩吻的主要毒性成分，可推测钩吻毒性成分可能为总吲哚类生物碱。

本发明中，所述减毒存效组分为玉叶金花、或鱼腥草和薄荷的混合物时，所述减毒存效组分在进行配伍前经预处理操作后，还进行萃取操作，所述萃取操作为：将减毒存效组分提取液经溶剂D萃取，得到减毒存效组分萃取液或水相溶液，所述溶剂D下列中的一种或两种以上：石油醚、二氯甲烷或乙酸乙酯。其中，以减毒存效组分为玉叶金花为例进行提取操作，具体操作见实施例20至实施例23。

实施例20

将实施例9得到的玉叶金花提取液经石油醚萃取，萃取3次，合并石油醚萃取液，减压回收浓缩即得到玉叶金花的石油醚萃取液。

实施例21

将实施例9得到的玉叶金花提取液经二氯甲烷萃取，萃取3次，合并二氯甲烷萃取液，减压回收浓缩即得到玉叶金花的二氯甲烷萃取液。

实施例22

将实施例9得到的玉叶金花提取液经乙酸乙酯萃取，萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收浓缩即得到玉叶金花的乙酸乙酯萃取液。

实施例23

将实施例9得到的玉叶金花提取液依次经石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取，萃取3次，弃去萃取液，收集水相，减压回收浓缩即得玉叶金花水相溶液。具体操作为：玉叶金花提取液先经石油醚萃取，弃去石油醚萃取液，收集水相；然后经石油醚萃取后的水相溶液再经二氯甲烷萃取，弃去二氯甲烷萃取液，收集水相；二氯甲烷萃取后的水相溶液再经乙酸乙酯萃取，弃去乙酸乙酯萃取液，收集水相，减压回收浓缩即得玉叶金花水相溶液。

在其他实施例中，玉叶金花水相溶液还可以是单独一种溶剂(石油醚、二氯甲烷或乙酸乙酯)萃取后的水相溶液。

将实施例17钩吻二氯甲烷萃取液分别与实施例20至实施例23得到的各组玉叶金花萃取液及水相溶液按重量份数1:40进行配伍，具体进行以下实施例：

实施例24

将实施例17钩吻二氯甲烷萃取液与实施例20得到的玉叶金花石油醚萃取液按重量份数1:40(钩吻二氯甲烷萃取液与玉叶金花石油醚萃取液浓度相同)进行配伍。

实施例25

将实施例17钩吻二氯甲烷萃取液与实施例21得到的玉叶金花二氯甲烷萃取液按重量份数1:40进行配伍。

实施例26

将实施例17钩吻二氯甲烷萃取液与实施例22得到的玉叶金花乙酸乙酯萃取液按重量份数1:40进行配伍。

实施例27

将实施例17钩吻二氯甲烷萃取液与实施例23得到的玉叶金花水相溶液按重量份数1:40进行配伍。

将上述实施例24至实施例27配伍得到的组合进行急性毒性试验。取60只KM种小鼠称重后随机分成6组：分别设为空白对照组、钩吻二氯甲烷萃取液组、实施例24、实施例25、实施例26、实施例27，苦味酸标记，试验前禁食不禁水12h，后一次性按给药体积0.01ml·g^-1灌胃给药，空白对照组给予同体积的生理盐水。给药后立即观察记录各组小鼠24h内的中毒体征和死亡情况，具体试验结果见表5。

由表5及试验结果表明，实施例17钩吻二氯甲烷萃取液的小鼠急性毒性死亡率为100％，但实施例24至实施例27钩吻二氯甲烷萃取液和玉叶金花90％醇提物的三种萃取液及水相溶液(石油醚萃取液、二氯甲烷萃取液、醋酸乙酯萃取液、水相溶液)配伍后，死亡率均有所下降。其中实施例27玉叶金花水相溶液与钩吻二氯甲烷萃取液配伍后小鼠死亡率最低，表明钩吻二氯甲烷萃取液与玉叶金花水相溶液的相畏效果最佳。

表5钩吻萃取液与玉叶金花萃取液及水相溶液配伍的筛选

为了进一步验证实施例27玉叶金花水相溶液与钩吻二氯甲烷萃取液配伍后，钩吻减毒存效效果最佳，再进行了以下的验证试验。取70只KM种小鼠称重后随机分成7组：空白对照组、实施例17钩吻二氯甲烷萃取液组(重复3组)，实施例27玉叶金花水相溶液与钩吻二氯甲烷萃取液按重量份数比为40：1配伍组(重复3组)，每组10只，苦味酸标记，试验前禁食不禁水12h，后一次性灌胃按0.5g·kg^-1给予相应的药物，空白对照组给予同体积的生理盐水。给药后立即观察记录小鼠24h内的中毒体征和死亡情况，试验结果见表6。

表6钩吻相畏部位的验证

注a：与钩吻二氯甲烷萃取液组相比*P＜0.05

由表6可知，实施例23的玉叶金花水相溶液能有效降低实施例17钩吻二氯甲烷萃取液的毒性，故确认实施例23玉叶金花水相溶液为钩吻的减毒溶液，与实施例17的钩吻二氯甲烷萃取液配伍后平均死亡率大幅降低(P＜0.05)，进一步验证了实施例27玉叶金花水相溶液与钩吻二氯甲烷萃取液配伍减毒存效效果最佳。

实施例28

本发明所述的钩吻减毒存效的配伍方法，其具体包括以下步骤：

1)、钩吻预处理：先称取钩吻生药10g并粉碎，加入50ml90％的乙醇中，浸泡0.5h后回流提取1h，提取2次，合并上层清液并减压回收浓缩，定容至钩吻提取液浓度为0.05g·ml^-1(以钩吻生药质量计)。

2)、钩吻萃取：用钩吻生药质量3倍的二氯甲烷萃取钩吻提取液，萃取3次，合并二氯甲烷萃取液，减压回收浓缩即得钩吻二氯甲烷萃取液，于4℃冰箱保存备用。

3)、玉叶金花预处理：先称取玉叶金花生药10g并粉碎，加入50ml90％的乙醇，浸泡0.5h后回流提取1h，提取2次，合并上层清液并减压回收浓缩，定容至玉叶金花提取液浓度为2.0g·ml^-1(以玉叶金花生药量计)。

4)、玉叶金花萃取：依次用玉叶金花生药质量3倍的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取玉叶金花提取液，萃取3次，弃去萃取液，收集水相，减压回收浓缩即得玉叶金花水相溶液，于4℃冰箱保存备用。

5)、将钩吻二氯甲烷萃取液和玉叶金花水相溶液等体积进行配伍，得到钩吻减毒存效的配伍组合物。

采用实施例28制备的钩吻减毒存效的配伍组合物检测小鼠扭体试验

取70只KM种小鼠，雌雄各半，随机分成7组，空白对照组(空白对照组给予0.32g·kg^-1的生理盐水)、吲哚美辛阳性对照组(0.01g·kg^-1)、钩吻二氯甲烷萃取液组(0.27g·kg^-1)、玉叶金花水相溶液组(7.12g·kg^-1)、钩吻二氯甲烷萃取液配伍玉叶金花水相溶液高剂量组(以钩吻生药量计，0.41g·kg^-1)、钩吻二氯甲烷萃取液配伍玉叶金花水相溶液中剂量组(以钩吻生药量计，0.32g·kg^-1)、钩吻二氯甲烷萃取液配伍玉叶金花水相溶液低剂量组(以钩吻生药量计，0.27g·kg^-1)，每组10只，苦味酸标记。各组灌胃给药30min后腹腔注射0.6％醋酸溶液0.1ml/10g。观察并记录注射醋酸溶液后15min内出现扭体反应(伸展后肢、腹部收缩内凹、臀部抬高)的次数，按式(1-1)计算镇痛率。

镇痛率＝(对照组扭体次数-给药组扭体次数)/对照组扭体次数×100％ (1-1)

试验结果见图1和图2。由图1可知，吲哚美辛组、钩吻二氯甲烷萃取液组及钩吻二氯甲烷萃取液配伍玉叶金花水相溶液高、中、低剂量组均能显著减少15min内醋酸所致的小鼠扭体次数，与空白对照的生理盐水组比较均有极显著性差异(P＜0.01)，钩吻二氯甲烷萃取液组及钩吻二氯甲烷萃取液配伍玉叶金花水相溶液高、中、低剂量组作用无明显差异，且钩吻二氯甲烷萃取液配伍玉叶金花水相溶液后镇痛率与剂量呈正相关。由图2可看出，钩吻二氯甲烷萃取液配伍玉叶金花水相溶液的镇痛率与生理盐水组相比具有显著性差异(*P＜0.05)；钩吻二氯甲烷萃取液配伍玉叶金花水相溶液的镇痛率与吲哚美辛组相比极显著性差异(ΔP＜0.01)。结果表明钩吻二氯甲烷萃取液配伍玉叶金花水相溶液后对化学刺激法引起的小鼠疼痛反应仍有显著的抑制作用。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利保护范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。