一组SNP位点在筛选光合作用强、生长快性状毛白杨中的应用及试剂盒

技术领域

本发明涉及分子遗传技术领域，尤其涉及一组SNP位点在筛选光合作用强、生长快性状毛白杨中的应用及试剂盒。

背景技术

杨树是北半球地区广泛栽培的重要用材树种，具有广泛的工业用途，是制浆造纸、胶合板、包装材料等的重要原料，有重要的经济价值。杨树的生长发育、木材组织的沉积都来源于光合作用，光合能力的强弱对于树木的生长速率具有决定性作用。面对人们对于自然资源需求量的增加，全球气候变暖，温室效应与日俱增，提高有限的林木及其他光合生物的光合能力以缓解由CO₂剧增导致的环境问题将是一项有效的措施。

但现有技术并没有提供一种光合作用和生长性能好的杨树的筛选方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一组SNP位点在筛选光合作用强、生长快性状毛白杨中的应用及试剂盒。本发明提供的应用能够实现光合能力强和生长快的杨树的快速筛选，大大加速育种进程。

本发明提供了一组SNP位点在筛选光合作用强、生长快性状毛白杨中的应用，所述SNP位点为毛白杨PetC基因第2068位、第2347位和第2457位碱基。

本发明还用于筛选上述技术方案中SNP位点的引物，所述毛白杨PetC基因第2068位碱基所用引物的序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；

第2347位碱基所用引物的序列如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示；

第2457位碱基所用引物的序列如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示。

优选的是，所述应用包括以下步骤：

1)提取毛白杨基因组DNA；

2)从基因组DNA中扩增出毛白杨PetC基因，利用上述技术方案所述引物分别对毛白杨PetC基因的第2068位、第2347位和第2457位的基因型进行分型；

3)根据所述步骤2)的分型结果，当所述毛白杨PetC基因第2068位基因型为AA、第2347位基因型为AG和第2457位基因型为CC时，所述毛白杨的光合能力强、生长快；

当所述毛白杨PetC基因第2068位基因型为AG、第2347位基因型为AA和第2457位基因型为TT时，所述毛白杨的光合能力弱、生长慢。

优选的是，所述毛白杨PetC基因的扩增的条件为：94℃预变性3min，93℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸1min，共35个循环，72℃最后延伸5min。

优选的是，所述步骤2)毛白杨PetC基因的第2068位、第2347位和第2457位的基因型进行分型体系各自独立地选为：以毛白杨PetC基因为模板，加入2.5μL 10×buffer，1.8μL25mmolL^-1MgCl₂，1μL>-1dNTP，Taq>-1权利要求2所述引物各1μL，加适量双蒸水至25μL。

本发明还提供了一种用于筛选光合作用强、生长快性状毛白杨的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括上述技术方案所述引物和扩增试剂；

所述扩增试剂包括PCR扩增缓冲液，25mmolL^-1MgCl₂，10mmolL^-1dNTP，Taq>

本发明还提供了一种与杨树光合作用强、生长快性状关联SNP位点的筛选方法，包括以下步骤：

1)提取杨树基因组DNA；

2)测定杨树基因组DNA中PetC基因的序列；

3)筛选出所述步骤2)得到的杨树PetC基因序列中出现频率>5％的SNP位点，对所述SNP位点进行基因型分型；

4)利用tassel软件对所述基因型分型的结果与杨树表型数据进行关联分析，并利用Qvalue软件对所述关联分析结果中的P值进行FDR多重检验，选取FDR<0.05的位点，获得杨树PetC基因内与杨树光合作用、生长显著关联的SNP位点。

本发明提供了一组SNP位点在筛选光合作用强、生长快性状毛白杨中的应用及试剂盒。应用本发明所述SNP位点，可以在毛白杨生长的早期就能够高效、准确地鉴定出光合能力强和生长快的单株，从而大大加速育种进程，缩短选育周期。

附图说明

图1是本发明提供的筛选光合作用强、生长快性状毛白杨SNP位点在PetC基因上的位置示意图。

具体实施方式

本发明提供了一组SNP位点在筛选光合作用强、生长快性状毛白杨中的应用，所述SNP位点为毛白杨PetC基因第2068位、第2347位和第2457位碱基。

本发明还用于筛选上述技术方案中SNP位点的引物，所述毛白杨PetC基因第2068位碱基所用引物的序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；

第2347位碱基所用引物的序列如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示；

第2457位碱基所用引物的序列如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示。

在本发明中，所述SNP位点的引物如表1所示。采用所述引物，能够高效、准确地鉴定出毛白杨PetC基因内与杨树光合和生长性状关联的3个功能SNP标记，有利于在杨树生长的早期就能够高效、准确地鉴定出光合能力强和生长快的单株，从而大大加速育种进程，缩短了选育周期。

表1 SNP位点的引物

在本发明中，所述毛白杨PetC基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。

在本发明中，所述在筛选光合作用强、生长快性状毛白杨中的应用优选包括以下步骤：

1)提取毛白杨基因组DNA；

2)从基因组DNA中扩增出毛白杨PetC基因，利用上述技术方案所述引物分别对毛白杨PetC基因的第2068位、第2347位和第2457位的基因型进行分型；

3)根据所述步骤2)的分型结果，当所述毛白杨PetC基因第2068位基因型为AA、第2347位基因型为AG和第2457位基因型为CC时，所述毛白杨的光合能力强、生长快；

当所述毛白杨PetC基因第2068位基因型为AG、第2347位基因型为AA和第2457位基因型为TT时，所述毛白杨的光合能力弱、生长慢。

在本发明中，所述毛白杨PetC基因等位位点第2068位为A/G、第2347位为A/G和第2457位为C/T。

在本发明中，所述光合作用性状的表型优选包括铁氧还蛋白-NADP⁺还原酶活性和铁氧还蛋白含量；所述生长性状的表型优选包括胸径和材积。在本发明中，当所述毛白杨PetC基因第2068位基因型为AA、第2347位基因型为AG和第2457位基因型为CC时，所述毛白杨的光合能力最强、生长最快。毛白杨PetC基因第2068位基因型为AA时，铁氧还蛋白含量最高；毛白杨PetC基因第2347位基因型为AG时，胸径和材积最大；毛白杨PetC基因第2457位基因型为CC时，铁氧还蛋白-NADP⁺还原酶活性最高。

毛白杨PetC基因第2068位基因型为AG、第2347位基因型为AA和第2457位基因型为TT时，所述毛白杨的光合能力最弱、生长最慢。毛白杨PetC基因第2068位基因型为AG时，铁氧还蛋白含量最低；毛白杨PetC基因第2347位基因型为AA时，胸径和材积最小；毛白杨PetC基因第2457位基因型为TT，铁氧还蛋白-NADP+还原酶活性最低。本领域技术人员可以根据这3个SNP位点的碱基预测毛白杨光合和生长性状。

在本发明中，所述步骤毛白杨PetC基因的第2068位、第2347位和第2457位的基因型进行分型体系各自独立地选为：以毛白杨PetC基因为模板，加入2.5μL 10×buffer，1.8μL 25mmolL^-1MgCl₂，1μL>-1dNTP，Taq>-1各位点对应的引物各1μL，加适量双蒸水至25μL。

本发明对所述毛白杨基因组DNA的提取方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的植物基因组DNA提取方法即可。

得到毛白杨基因组DNA后，本发明从基因组DNA中扩增出毛白杨PetC基因，本发明对所述PetC基因的扩增方法和条件没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的从基因组中扩增特定基因的方法即可。如设计PetC基因扩增用引物，所述引物序列优选如SEQ IDNO.11和SEQ ID NO.12所示。所述扩增体系为：以毛白杨基因组DNA为模板，加入2.5μL 10×buffer，1.8μL25mmolL^-1MgCl₂，1μL>-1dNTP，Taq>-1扩增用引物各1μL，加适量双蒸水至25μL。

在本发明中，所述毛白杨PetC基因的扩增的条件为：94℃预变性3min，93℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸1min，共35个循环，72℃最后延伸5min。

本发明还提供了一种用于筛选光合作用强、生长快性状毛白杨的试剂盒，包括表1所述引物和扩增试剂；

所述扩增试剂包括PCR扩增缓冲液，25mmolL^-1MgCl₂，10mmolL^-1dNTP，Taq>

本发明还提供了一种与杨树光合作用强、生长快性状关联SNP位点的筛选方法，包括以下步骤：

1)提取杨树基因组DNA；

2)测定杨树基因组DNA中PetC基因的序列；

3)筛选出所述步骤2)得到的杨树PetC基因序列中出现频率>5％的SNP位点，对所述SNP位点进行基因型分型；

4)利用tassel软件对所述基因型分型的结果与杨树表型数据进行关联分析，并利用Qvalue软件对所述关联分析结果中的P值进行FDR多重检验，选取FDR<0.05的位点，获得杨树PetC基因内与杨树光合作用、生长显著关联的SNP位点。

在本发明中，提取杨树基因组DNA进行目的基因扩增，本发明对所述杨树基因组DNA的提取方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的植物基因组提取方法即可。

得到杨树基因组DNA后，本发明对PetC基因进行扩增，本发明对所述扩增用引物和扩增体系条件没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的从基因组中扩增目的基因的方法进行扩增即可。

本发明对测序方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的生物公司测序方法即可。

测定完序列，筛选出所述杨树PetC基因序列中出现频率>5％的SNP位点，对所述SNP位点进行基因型分型。在本发明中，优选采用组合利用MEGA6.0和DnaSP5.10软件对序列进行分析，标出SNP位点；基因分型优选采用锁核酸(LNA)法。

本发明利用tassel软件对所述基因型分型的结果与杨树表型数据进行关联分析，获得杨树PetC基因内与杨树光合作用、生长显著关联的SNP位点。本发明所述表型数据优选包括：净光合速率、蒸腾速率、气孔导度、胞间CO₂浓度、铁氧还蛋白-NADP⁺还原酶活性、铁氧还蛋白含量、木质素含量，综纤维素含量，α-纤维素含量，微纤丝角，树高，胸径和材积。本发明利用tassel软件进行关联分析，将结果中的P值进行从小到大排列，利用Qvalue软件进行FDR多重检测，选择FDR<0.05即为显著关联位点。

更优选的，利用TASSEL软件中的混合线性模型进行基因型和表型的关联分析，首先选择P<0.05的关联位点，然后利用FDR假阳性多重检测，选择Q<0.05的与光合和生长性状显著关联的SNP功能位点。

下面结合实施例，对本发明提供的一组SNP位点在筛选光合作用强、生长快性状毛白杨中的应用及试剂盒进行详细的描述，但是不能将它们理解为对本申请保护范围的限定。

实施例1

光合和生长性状显著关联的SNP功能位点的筛选

(1)DNA提取

DNeasy Plant Mini Kits(Qiagen,Inc.,Valencia,CA,USA)对毛白杨基因组DNA进行提取。

(2)扩增目的基因

毛白杨叶片总RNA的提取和cDNA的合成分别按RNeasy Plant Mini Kits(Qiagen,Inc.,Valencia,CA,USA)和Clonetech试剂盒描述的方法进行。应用25μL DNA聚合酶链反应(PCR)体系，以毛白杨叶片cDNA为模板，加入2.5μL 10×buffer，1.8μL 25mmolL^-1MgCl₂，1μL10mmolL^-1dNTP，Taq>-1扩增引物各1μL，加适量双蒸水至25μL。扩增引物如表2中所示。

表2基因扩增所用引物序列

PCR反应条件为：94℃预变性3分钟，93℃变性30秒，58℃退火30秒，72℃延伸1分钟，共35个循环，72℃最后延伸5分钟。最终扩增出长约2500bp的cDNA片段。

(3)PCR产物的克隆、测序

将PCR扩增得到的目的基因片段回收后连接于pGEM-T上。连接产物转化大肠杆菌DH5α，筛选阳性克隆，送公司测序。

(4)SNP发现和基因型分型

以最大程度地反映毛白杨自然分布区域的43个基因型个体的总DNA为模板进行PCR扩增，将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分离，回收、纯化目的片段后与PGEM-T载体连接，转化后挑取阳性单克隆进行序列测定，然后将每一基因片段的核苷酸序列拼接成完整的基因序列。组合利用MEGA6.0和DnaSP5.10软件对每一基因的43个序列进行分析，标出SNP位点。基因分型采用锁核酸(LNA)法(Koshkin等，Tetrahedron Lett.(1998)39,4381-4384)。

(5)表型的测定

利用LI6400光合测定仪测定净光合速率、蒸腾速率、气孔导度、胞间CO2浓度四个光合性状；利用酶联免疫(ELISA)试剂盒测定铁氧还蛋白含量，铁氧还蛋白-NADP+还原酶活性两个光合相关指标；利用近红外光谱测定仪测定每个基因型个体的木质素含量、纤维素含量、棕纤维素含量三个木材化学性状指标；利用X射线衍射仪测定微纤丝角；利用生长性状测定工具测定其胸径、树高、材积等指标。

(6)标记性状关联分析

利用TASSEL软件中的混合线性模型进行基因型和表型的关联分析，首先选择P<0.05的关联位点，然后利用FDR假阳性多重检测，选择Q<0.05的与光合和生长性状显著关联的SNP功能位点。

实施例2

利用关联作图的方法鉴定毛白杨PetC基因内与杨树光合和生长性状相关的功能SNP标记。

1、关联群体的选择：全国毛白杨基因库于1982年收集并保存，包括1047株基因型个体。对毛白杨主要分布区内气象条件进行调研，依据热、光和水等16个气象因子，最终将整个毛白杨分布区划分为南部气候区、东北部气候区和西北部气候区。所有材料在三个气候区覆盖的10省市(北京、河北、河南、山东、山西、陕西、甘肃、宁夏、安徽和江苏)的100个县收集，通过根繁方式统一种植在山东省冠县国营苗圃。本发明从全国毛白杨基因库中选取能够最大程度地反映毛白杨天然分布范围的435株个体作为关联群体。

2、表型的测定：共有13种表型用于关联分析，包括净光合速率、蒸腾速率、气孔导度、胞间CO₂浓度、铁氧还蛋白-NADP+还原酶活性、铁氧还蛋白含量、木质素含量，综纤维素含量，α-纤维素含量，微纤丝角，树高，胸径和材积。光合指标测定于2010年7月20日至8月8日期间的晴天，于每日早9:00-11:00进行，测量时，选取了实验群体每一个体主杆顶部第4片至第6片功能叶，并挂标签以做标记。光合性状的测量以及数据记录，由便携式光合测定系统(Li6400,LiCor)完成(具体操作过程见Li-6400x/说明书)。铁氧还蛋白含量和铁氧还蛋白-NADP+还原酶活性测定于2016年6月测定，利用酶联免疫试(ELISA)剂盒测定，选取了实验群体每一个体主杆顶部第4片至第6片功能叶，立即放入液氮中，带回实验室用液氮研磨成粉末后测定。木材测定取样时通过取木钻从关联群体的435株个体的1.35m处取样，所取的木材样品材料包含树皮和髓。材料长15厘米直径为10毫米，采集于2010年。生长性状收集于2011年。利用近红外光谱测定仪测定每个基因型个体的木质素含量、纤维素含量、棕纤维素含量三个木材化学性状指标；利用X射线衍射仪测定微纤丝角；利用生长性状测定工具测定其胸径、树高、材积等指标。

3、SNP发现：从全国毛白杨基因库中选出43株个体，它们能够最大程度地反映毛白杨天然分布范围。以这43株个体的总DNA为模板，对每株个体的PetC基因进行克隆测序。

3.1扩增目的基因

应用25μL DNA聚合酶链反应(PCR)体系,以毛白杨叶片cDNA为模板,加入2.5μL 10×buffer,1.8μL25mmolL^-1MgCl₂,1μL>-1dNTP，Taq>-1引物各1μL(SEQ>

PCR反应条件为：94℃预变性3分钟，93℃变性30秒，58℃退火30s，72℃延伸1分钟，共35个循环，72℃最后延伸5分钟。最终扩增出长约2500bp的cDNA片段。

3.2PCR产物的克隆、测序

将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分离，回收、纯化目的片段后连接于pGEM-T上。连接产物转化大肠杆菌DH5α，筛选阳性克隆进行序列测定。

结合利用MEGA6.0和DnaSP5.10软件分析毛白杨PetC基因的43个序列，标出基因内的突变位点，计算SNP频率和在基因不同区域的分布模式。结果见表3，表3示出了毛白杨PetC基因的核苷酸多态性。最终发现毛白杨PetC基因内共52个普通SNP位点(最小等位频率≥5％)。

表3基因不同区域SNP位点分布情况

注：插入缺失的区域在计算时被排除

(4)DNA提取和基因分型

从毛白杨个体的叶片中提取基因组DNA，毛白杨总DNA提取按DNeasy Plant MiniKits(Qiagen,Inc.,Valencia,CA,USA)描述的方法进行。基因分型采用锁核酸(LNA)法(Koshkin等，Tetrahedron Lett.(1998)39,4381-4384)，设计特定的引物对普通SNP在435株个体进行基因型分型，引物如表1中所示。

(5)关联分析：利用TASSEL5.0软件对基因分型结果与13个毛白杨光合和生长性状进行关联分析。运用混合线性模型(MLM)进行分析，最终获得与表型性状显著关联的功能SNP标记。在进行关联分析时，使用Q值和K值来减少假阳性关联，Q值用来估算群体结构，K值用来估算个体之间的亲缘关系。Q值和K值分别使用STRUCTURE VERISON 2.3软件和SPAGeDi软件计算。最后使用Qvalue软件进行假阳性检验，选择Q<0.05的与光合和生长性状显著关联的功能SNP标记。关联结果见表4，表4示出了毛白杨PetC基因内与光合和生长显著关联的SNP分子标记。最终获得3个SNP标记与光合和生长性状显著关联，分别位于毛白杨PetC基因的3’UTR和外显子，解释表型变异率为12.04％到19.46％。获得的3个功能SNP标记不同基因型对应的表型平均值见表5。位于毛白杨PetC基因2068bp的SNP chr19_18617980与铁氧还蛋白含量显著关联，AA基因型对于的铁氧还蛋白均值为三种基因型中最高；位于毛白杨PetC基因2347bp的SNP chr19_18617701与胸径和材积显著关联，AG基因型对应的这两种表型均值均为三种基因型中最高；位于毛白杨PetC基因2457bp的SNP chr19_18617591与铁氧还蛋白-NADP+还原酶活性显著关联，CC基因型对应的铁氧还蛋白-NADP⁺还原酶活性最高。因此我们可以根据实际需要来选择合适的功能SNP标记来筛选具有目的表型的个体。图1示出了毛白杨PetC基因与杨树光合和生长性状显著关联的功能SNP标记在基因中的位置。

表4 SNP位点对光合与生长性状的贡献

表5 SNP位点的基因型效应

本发明上述使用的试剂均可包含在筛选杨树光合和生长性状的试剂盒中。

从以上实验数据可以看出，本发明的毛白杨PetC基因内与杨树光合和生长性状关联的3个功能SNP标记，可以在杨树生长的早期就能够高效、准确地鉴定出光合能力强和生长快的单株，从而大大加速育种进程，缩短选育周期。同时，也为研究PetC基因的功能机制和此基因在林木育种中的应用提供了重要的理论研究基础。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 北京林业大学

<120> 一组SNP位点在筛选光合作用强、生长快性状毛白杨中的应用及试剂盒

<130> 2016

<160> 12

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

acacttcttt aaaatcaaca accag 25

<210> 2

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

cgacacgtca gtaaccgt 18

<210> 3

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

cgacacgtca gtaaccgc 18

<210> 4

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

tgtgatgctt gacaatctat tcttt 25

<210> 5

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

tgtgatgctt gacaatctat tcttc 25

<210> 6

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

acggttaact agttatcata ggaat 25

<210> 7

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

tgtgatgctt gacaatctat tcttt 25

<210> 8

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

tggttaacta gttatcatag gaatga 26

<210> 9

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

cggttaacta gttatcatag gaatga 26

<210> 10

<211> 2597

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

tcgtgtggca ccaatgaagc taatgtgcct tatctagtac agttgtggtc gttatagttt 60

taacagtcct ctcgcatcac caaatcattc ataataccat caaagtgtac tcagtttcct 120

gtccaagaat catcaatcca tggcttcctc tacgctctcc cctgccactc cctcacaggt 180

aaagaaaaag aaaaaacccc aacaaacatt gattattctt gaacttaatt tccttctctt 240

tgatgatttg gattgaatta tgtgtttttg ttttgtgtat tagctatgct ctagcaagag 300

tggcatgttc tctcctacac aggcggtgtt tgtgaaagca acaaggacaa atatggtgtt 360

aaaggagaga ggaatgagaa ttacatgcca ggctacaagt gttcctgctg atgataaagt 420

gcctgacatg ggtaagaggg agcttatgaa tctgcttctt ttgggtgctc tttcactccc 480

cactgctggc atgttggttc cttacaccta tttctttgtc ccttctgggt aagaaatctt 540

cttcttcttc ttcaaattta gtttggtttt ttcctttatt atagattttt tttttgttaa 600

tttccccttg cttcgttata ggttcttcaa tggaaatttt gattctctaa agggcattct 660

ttctaaaatt ccactaatga tgtgtcatag ctaaaatcaa cttgagaagt aaagaataca 720

aaaattccga tgctgtgttt aagtttataa attatttctt cgagattgac cttgcttgct 780

aagttctaaa ttgcctcgta tatacaattg ctatagttta tttgtttagg gattaaattt 840

ctggccatta gcaaccatag catgcctgca tttcgttggg acgttgctaa atacaaatta 900

cttttccttg ctgtaattgg aaaaatttat caggctcgga ggaggtggtg gtggcaccgt 960

tgccaaggat gcccttggaa atgatatcat tgcagagcaa tggcttaaga ctcatggccc 1020

tggtgaccga accctttctc aaggattaaa ggtactggca gctttccttt cctttcttaa 1080

agaacatgtt ttccattgca tttccctttc ttattgtata aattcgttgt ccactgattg 1140

gtcattagaa ggagtacatt tatcgctgtt ttgatgcaag ataatcatat tttctgttta 1200

ttaacttgtc agaaagtatt acacctttgg ttctaatttt ctttcaagtt cttattagaa 1260

gtgggtcatg cattgtaaga gatgttggct tggatccaat cattgctgtg atgctgtctt 1320

gctctagcgt aaaacagagc tcgttatatg tttgcacttg agccagtgag atatttgtga 1380

aattgctgtc acacttctac acggggtagt atcgctgtaa gcagacctat aaaatgttgc 1440

aaactaaatc aatttttgtt ccttgtgaaa agaatctgtg gaaattgtct aaaatggtga 1500

gaaaattagt gttgtttcat atttaggatt ttcaatatca tatcttcaaa aattttttga 1560

ggatctattt taacaaaact gatattactt gcaagaacac aatcatgcgg cgctcaaaga 1620

ttgatttcta tcaacttcgg atactctgaa ataatttgca atactgaaaa gtgaaaatca 1680

tttggattgt tttttatgga tttcagggag atccaaccta ccttgttgtg gagaaagata 1740

gagttcttgc aacttatgga attaatgcag tctgcacaca ccttgggtgt gtcgtgccct 1800

ggaatcaagc tgagaagaag ttcatctgcc cctgccatgg atcacagtac aatgaccaag 1860

gaagagttgt ccgaggacct gctcctctgg taagtcaaac ataactttcc ttttatttct 1920

tggtggatta ctctatttta gatgaataaa agaacaacaa cacttcttta aaatcaacaa 1980

ccagcaacag tttgcttgct ctaacgattt ttgagttctc cctggcaata accgccttca 2040

atatgacttt gctgtgcagt cattggcgct ggctcactgc gacgtagacg acggcaaggt 2100

ggtcttcgtt ccatgggtcg aaacagactt cagaaccgga gatgctccat ggtggtctta 2160

agcctcttgt tcaatcaatc atcaaatgtt tcatatattc aagacacgaa tcggtttgtt 2220

ttgcaacaat gccaaaacat ccttttgtca tagaggcatg ctatgtgaat tggagctcat 2280

aagatgtaag gataaccata tgatttaagc atggatattc ttgtgatgct tgacaatcta 2340

ttctttgtac ctaaattcta ttgcattatc atttatgtcc gtagccatgg agcaatggca 2400

accatacatg ttatttgtag ctgccataca tgccaattga tcaatagtat ccttactgtt 2460

ttcaaatcta ggagatcaaa tctatcccgc aataacattt ataagtcagg aattctaatc 2520

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<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 11

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