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基于核糖核苷酸修饰引物的连接酶非依赖性基因克隆方法

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摘要

本发明公开了基于核糖核苷酸修饰引物的连接酶非依赖性基因克隆方法，其中扩增目标基因与质粒载体的引物的5’端具有3‑4个核糖核苷酸，核糖核苷酸间有4‑6个脱氧核糖核苷酸；3’端的20个碱基与目标DNA序列配对；引物间的5’端至最后一个核糖核苷酸的连续碱基序列互补配对。PCR扩增目标基因与质粒载体后，热碱处理在核糖核苷酸处断裂DNA链，产生长10‑20个核苷酸的3’单链突出端。由于目标基因与质粒载体的3’突出端碱基序列互补，形成稳定的完全配对双链，不需要进行DNA连接反应，直接转化大肠杆菌。本发明目标基因克隆不依赖于限制性核酸内切酶与DNA连接酶，操作通量大，可用于大规模基因克隆。

著录项

  • 公开/公告号CN107058361A

    专利类型发明专利

  • 公开/公告日2017-08-18

    原文格式PDF

  • 申请/专利权人 苏州旷世骏弛生物科技有限公司;

    申请/专利号CN201611236099.0

  • 发明设计人 刘喜朋;

    申请日2016-12-28

  • 分类号

  • 代理机构

  • 代理人

  • 地址 215500 江苏省苏州市常熟经济技术开发区四海路11号

  • 入库时间 2023-06-19 03:03:45

法律信息

  • 法律状态公告日

    法律状态信息

    法律状态

  • 2017-09-12

    实质审查的生效 IPC(主分类):C12N15/70 申请日:20161228

    实质审查的生效

  • 2017-08-18

    公开

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