一种尿液潜血检测试纸及其制备方法

技术领域

本发明涉及尿液检测领域，具体涉及一种尿液潜血检测试纸及其制备方法。

背景技术

尿潜血又称尿红细胞，即尿液中出现的红细胞。尿红细胞增多是泌尿系统(肾脏，膀胱或输尿管)出血，血液进入尿液导致。这种尿标本也被称作血尿，血尿95％以上是由于泌尿系本身疾病所致，尿红细胞增加是一个危险的信号，可能是泌尿系统恶性肿瘤的唯一临床表现。

尿红细胞增多常见的原因有结核、肿瘤、外伤、急性肾盂肾炎、泌尿系结石、急性肾小球炎、慢性肾炎等。此类症状需要及时就医，以免耽误病情，发展到尿毒症。所以，建立准确、灵敏、快速的尿红细胞检测方法对潜在的泌尿系统肿瘤、肾功能病变以及尿毒症患者的及时、准确的诊断具有重要的意义。

尿红细胞检测方法主要采用显微镜检查、干化学尿液分析仪、流式细胞尿液分析仪及显微镜式尿液分析仪等方法进行检测。其中干化学检测是通过其颜色的变化对样品进行定性和半定量测定，与其它方法比较，操作简便，成本低，速度快。干化学检测主要原理是利用过氧化物酶法，只是底物过氧化物和色原物质各有不同。已知现有的干化学试纸常选用含单个过氧基团的氢过氧化物，如过氧化羟基异丙苯等，氢过氧化物的稳定性较差，利用其制备的试纸在久置之后容易挥发和分解，从而导致检测的准确度降低。作为色原的联苯胺具有强烈的致癌性，所以不推荐使用联苯胺作为色原物质。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有的检测方法准确度低、稳定性差的问题，而提供一种尿液潜血检测试纸及其制备方法。

本发明首先提供一种尿液潜血检测试纸，包括基板和固定在基板上的滤纸，所述的滤纸是先浸入到A液中，然后再浸入到B液中得到的；

所述的A液包括：缓冲液、纯化水和表面活性剂A；

所述的B液包括：乙醇、表面活性剂B、色原、过氧化物和敏化剂；

所述的过氧化物的结构如式Ⅰ所示：

式Ⅰ中，R1、R2、R3和R4独立的选自-H、-OH、脂肪或芳香醇类取代基、酚取代基、卤素取代基或C1-C3的烷基基团。

优选的是，所述的缓冲液的体积(mL)∶纯化水的体积(mL)∶和表面活性剂A的质量(g)为(300～350)∶(650～680)∶(40～50)。

优选的是，所述的乙醇的体积(mL)∶表面活性剂B的质量(g)∶色原的质量(g)∶过氧化物的质量(g)∶敏化剂的体积(mL)为(800～1000)∶(15～30)∶(2～3)∶(3～7)∶(3～5)。

优选的是，所述的缓冲液包括磷酸盐缓冲液或柠檬酸盐缓冲液。

优选的是，所述的缓冲液包括磷酸氢二钠和磷酸二氢钾的混合液。

优选的是，所述的表面活性剂A和表面活性剂B为聚乙烯吡咯烷酮、十二烷基硫酸钠或聚乙二醇。

优选的是，所述的色原为四甲基联苯胺及其衍生物。

优选的是，所述的敏化剂为喹啉及其衍生物。。

优选的是，所述的B液还包括底色染料，所述的底色染料选自日落黄、甲基橙、橙黄G或柠檬黄中的一种或几种。

本发明还提供一种尿液潜血检测试纸的制备方法，该方法包括：

步骤一：将滤纸浸入A液后，在80～100℃条件下进行第一次干燥，时间为20～30分钟；

步骤二：将第一次干燥后的滤纸浸入B液后，在40～60℃条件下进行第二次干燥，时间为10～20分钟；

步骤三：将第二次干燥后的滤纸与基板固定，得到一种尿液潜血检测试纸；

所述的A液包括：缓冲液、纯化水和表面活性剂A；

所述的B液包括：乙醇、表面活性剂B、色原、过氧化物、敏化剂；

所述的过氧化物的结构如式Ⅰ所示：

式Ⅰ中，R1、R2、R3和R4独立的选自-H、-OH、脂肪或芳香醇类取代基、酚取代基、卤素取代基或C1-C3的烷基基团。

本发明的有益效果

本发明首先提供一种尿液潜血检测试纸，该试纸采用新型固体二叔丁基过氧化异丙基苯及其衍生物作为底物过氧化物，该类物质为过氧化基团上不含氢，且所述过氧化物包含2个及以上过氧化基团，使尿液潜血试纸的稳定性更高，延长了试纸有效期，有利于试纸的长期存储和运输。同时，本发明还利用喹啉及其衍生物作为敏化剂，提高尿液潜血检测的灵敏度。

本发明还提供一种尿液潜血检测试纸的制备方法，该方法是采用两步浸液的方式制备潜血快速检测试纸，在一定条件下，红细胞中具有过氧化物酶样活性的亚铁血红素能够催化过氧化物与色原反应，使色原脱氢产生发色基团，显色速度快且稳定，该方法制备的潜血快速检测试纸最低检测浓度为4Cells/μL，检测范围可达到4～200Cells/μL，试纸呈现从黄色到深绿色五个明显色阶，易于目视分辨和机读，本发明的试纸制备方法简单，易操作，性能稳定，测试速度快，测定结果准确。

具体实施方式

本发明首先提供一种尿液潜血检测试纸，包括基板和固定在基板上的滤纸，所述的滤纸是先浸入到A液中，然后再浸入到B液中得到的；

所述的A液包括：缓冲液、纯化水和表面活性剂A；所述的缓冲液的体积(mL)∶纯化水的体积(mL)∶和表面活性剂A的质量(g)优选为(300～350)∶(650～680)∶(40～50)。

所述的B液包括：乙醇、表面活性剂B、色原、过氧化物和敏化剂；所述的乙醇的体积(mL)∶表面活性剂B的质量(g)∶色原的质量(g)∶过氧化物的质量(g)∶敏化剂的体积(mL)优选为(800～1000)∶(15～30)∶(2～3)∶(3～7)∶(3～5)。

按照本发明，所述的过氧化物的结构如式Ⅰ所示：

式Ⅰ中，R1、R2、R3和R4独立的选自-H、-OH、脂肪或芳香醇类取代基、酚取代基、卤素取代基或C1-C3的烷基基团。所述的卤素优选为-Cl或-Br。

按照本发明，本发明所述的式Ⅰ所述的过氧化物的来源为可以为商购，也可以自制，采用本领域常规方法制备即可，没有特殊限制，本发明采用新型固体二叔丁基过氧化异丙基苯及其衍生物作为底物过氧化物，该类物质为过氧化基团上不含氢，且所述过氧化物包含2个及以上过氧化基团，使尿液潜血试纸的稳定性更高，延长了试纸有效期。

按照本发明，所述的缓冲液包括磷酸盐缓冲液或柠檬酸盐缓冲液，更优选为磷酸盐缓冲溶液，最优选为磷酸氢二钠和磷酸二氢钾的混合液。所述的磷酸氢二钠的浓度优选为0.3-1.0mol/L，磷酸二氢钾的浓度优选为0.3-1.0mol/L；所述的混合液中，磷酸氢二钠和磷酸二氢钾的体积比优选为1∶2；所述的缓冲液的pH优选为5.0～7.0。

按照本发明，所述的表面活性剂A和表面活性剂B可以相同也可以不同，优选为聚乙烯吡咯烷酮、十二烷基硫酸钠或聚乙二醇，更优选为聚乙烯吡咯烷酮，最优选为聚乙烯吡咯烷酮K30或聚乙烯吡咯烷酮K90。

按照本发明，所述的色原优选为四甲基联苯胺及其衍生物，更优选为3,3',5,5'-四甲基联苯胺。

按照本发明，所述的敏化剂优选为喹啉及其衍生物，更优选为6-甲氧基喹啉或3-甲氧基喹啉。本发明还利用喹啉及其衍生物作为敏化剂，提高尿液潜血检测的灵敏度。

在本发明中，为了使颜色变化明显也可以在B液中添加底色染料，所述的底色染料优选黄色系染料物质，更优选为日落黄、甲基橙、橙黄G或柠檬黄中的种或几种。

本发明还提供一种尿液潜血检测试纸的制备方法，该方法包括：

步骤一：将滤纸浸入A液后，在80～100℃条件下进行第一次干燥，时间为20～30分钟；

步骤二：将第一次干燥后的滤纸浸入B液后，在40～60℃条件下进行第二次干燥，时间为10～20分钟；

步骤三：将第二次干燥后的滤纸与基板固定，得到一种尿液潜血检测试纸；

所述的A液包括：缓冲液、纯化水和表面活性剂A；

所述的B液包括：乙醇、表面活性剂B、色原、过氧化物、敏化剂；

所述的过氧化物的结构如式Ⅰ所示：

式Ⅰ中，R1、R2、R3和R4独立的选自-H、-OH、脂肪或芳香醇类取代基、酚取代基、卤素取代基或C1-C3的烷基基团。

按照本发明，所述的过氧化物更优选为二叔丁基过氧化异丙基苯。

将制备好的试纸在不同浓度梯度的潜血标准液中反应显色，根据显色制备比色卡，通过对比比色卡可以获得所测样本潜血含量。

以下通过具体实施例进一步说明本发明。但实施例的具体细节仅用于解释本发明，不应理解为对本发明总的技术方案的限定。

实施例1

配制浸渍液A液：磷酸盐缓冲溶液(磷酸氢二钠和磷酸二氢钾缓冲溶液)(pH＝6.0±0.02)310mL，纯化水670mL，聚乙烯吡咯烷酮K30 45g。

配制浸渍液B液；乙醇900mL，聚乙烯吡咯烷酮K30 25g，3,3',5,5'-四甲基联苯胺2.5g，二叔丁基过氧化异丙基苯3.0g，6-甲氧基喹啉5mL，柠檬黄260mg，橙黄G50mg。

将A液和B液配制完成，先将滤纸充分浸入浸渍液A液后取出，于100℃条件下干燥30分钟，然后将干燥后的滤纸浸入B液于60℃条件下干燥10分钟，将干燥后的滤纸与基板固定，裁成矩形纸条，得到一种尿液潜血检测试纸。

所述的二叔丁基过氧化异丙基苯的结构式如下：

实施例2

配制浸渍液A液：磷酸盐缓冲溶液(磷酸氢二钠和磷酸二氢钾缓冲溶液)pH＝6.0±0.02)310mL，纯化水670mL，聚乙烯吡咯烷酮K30 45g。

配制浸渍液B液；乙醇900mL，聚乙烯吡咯烷酮K30 25g，3,3',5,5'-四甲基联苯胺2.5g，二叔丁基过氧化异丙基苯4.8g，6-甲氧基喹啉4mL，柠檬黄260mg，橙黄G 50mg。

将A液和B液配制完成，先将滤纸充分浸入浸渍液A液后取出，于100℃条件下干燥30分钟，然后将干燥后的滤纸浸入B液于60℃条件下干燥10分钟，将干燥后的滤纸与基板固定，裁成矩形纸条，得到一种尿液潜血检测试纸。

实施例3

配制浸渍液A液：磷酸盐缓冲溶液(磷酸氢二钠和磷酸二氢钾缓冲溶液)(pH＝6.0±0.02)300mL，纯化水650mL，聚乙烯吡咯烷酮K30 40g。

配制浸渍液B液；乙醇800mL，聚乙烯吡咯烷酮K30 15g，3,3',5,5'-四甲基联苯胺2g，二叔丁基过氧化异丙基苯3g，6-甲氧基喹啉3mL，柠檬黄200mg，橙黄G 50mg。

将A液和B液配制完成，先将滤纸充分浸入浸渍液A液后取出，于80℃条件下干燥20分钟，然后将干燥后的滤纸浸入B液于40℃条件下干燥20分钟，将干燥后的滤纸与基板固定，裁成矩形纸条，得到一种尿液潜血检测试纸。

实施例4

配制浸渍液A液：磷酸盐缓冲溶液(磷酸氢二钠和磷酸二氢钾缓冲溶液)(pH＝6.0±0.02)350mL，纯化水680mL，聚乙烯吡咯烷酮K30 50g。

配制浸渍液B液；乙醇1000mL，聚乙烯吡咯烷酮K30 30g，3,3',5,5'-四甲基联苯胺3g，二叔丁基过氧化异丙基甲苯7g，6-甲氧基喹啉5mL，柠檬黄300mg，橙黄G 60mg。

将A液和B液配制完成，先将滤纸充分浸入浸渍液A液后取出，于90℃条件下干燥25分钟，然后将干燥后的滤纸浸入B液于50℃条件下干燥15分钟，将干燥后的滤纸与基板固定，裁成矩形纸条，得到一种尿液潜血检测试纸。

实施例5

将实施例1-4得到的尿液潜血快速检测试纸浸入新鲜的尿样中，2～4s后取出，平放60s后，将该试纸上所显的颜色与标准色卡相比较，即可判断出被测尿样中潜血的浓度。用该试纸测定的结果与潜血镜检测定的结果比较，与镜检测定结果相符，符合快速测定的要求范围，实验结果表明：检测浓度为4Cells/μL时可以检出，检测范围可达到4～200Cells/μL。