锡中卟啉在制备地中海贫血治疗药物中的应用

技术领域

本发明涉及锡中卟啉的新用途，具体涉及锡中卟啉在制备地中海贫血治疗药物中的应用。属于医药技术领域。

背景技术

地中海贫血(简称“地贫”)是世界范围内最常见的血红蛋白遗传疾病之一。其致病主要机制为α或β珠蛋白基因的突变抑制了珠蛋白亚基的合成，使得红细胞内α/β珠蛋白链不平衡，造成红细胞膜珠蛋白沉积，继而红细胞膜结构不稳定易破碎，病理特征表现为无效造血、贫血、机体铁超载等。

目前地贫患者治疗手段主要包括输血祛铁联合治疗、脾脏切除治疗、骨髓移植治疗、基因治疗。输血祛铁治疗，需长期进行，且不可治愈及费用昂贵，给患者家庭造成严重经济负担；脾脏切除治疗，仅针对中间型地贫患者有较好疗效，切除脾脏会降低患者自身免疫力，提高患病风险；骨髓移植治疗，现有唯一治愈地贫患者的成熟技术，但是治疗成本过于昂贵，骨髓配型少且困难，无法大范围内治疗地贫患者；基因治疗，技术尚未完全成熟，研究报道治疗费用高达上百万美元，是绝大多数家庭无法承担的费用，且无法普遍治疗。本发明想通过研究发现新型治疗地贫的策略，靶向地贫无效造血根源，既能有效改善贫血，又能缓解继发性铁超载血，降低可能的并发症，减少患者家庭经济负担，增加患者治疗适普性。

基于现阶段几种治疗地贫患者主要方法存在的缺陷，寻找一种较为经济可靠且可以普遍治疗的策略是地贫治疗的新方向。

锡中卟啉曾被报道用于婴幼儿黄疸治疗，目前尚未有将锡中卟啉用于地中海贫血治疗的相关报道。

发明内容

本发明的目的是为克服上述现有技术的不足，提供锡中卟啉在制备地中海贫血治疗药物中的应用。

为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：

1、锡中卟啉(SnMP)在制备地中海贫血治疗药物中的应用。

优选的，地中海贫血小鼠体内SnMP治疗的剂量为25μmol/kg，腹腔注射3次/周次，持续打4周后，每周1次维持。

2、一种地中海贫血治疗药物，其有效成分为锡中卟啉。

本发明的有益效果：

铁超载是地贫患者显著特征之一，伴随有多种并发症，如生长发育抑制、糖尿病及肝癌等。机体铁循环包含铁的吸收、运输、利用/储存和回收再利用几个过程。本发明使用锡中卟啉腹腔注射β地中海贫血小鼠，发现锡中卟啉可以让地贫小鼠无效红系生成回归正常，有效缓解红细胞的α/β珠蛋白链不平衡，提升红细胞寿命、红细胞总数及血红蛋白水平，同时降低血清及肝脏的铁含量及脾肿大。

经锡中卟啉治疗后，地贫小鼠无效造血、贫血和铁超载均得到有效缓解，无明显毒副作用，治疗实施方便，高剂量之后，只须低剂量维持即可保持疗效。

附图说明

图1为本发明采用Triton–acetic acid–urea(简称TAU)凝胶电泳技术检测SnMP对小鼠外周血红细胞内α珠蛋白沉积的影响：A为TAU胶电泳染色结果，B为标准化后的各组α珠蛋白沉积电泳条带的灰度值统计。ns无显著差异；****＜0.0001。

图2为本发明采用流式细胞术检测SnMP对小鼠外周血红细胞半衰期的影响。ns无显著差异；*p＜0.05；***＜0.001。

图3为本发明采用血常规检测SnMP对小鼠外周血贫血指标的影响：A为红细胞数，B为血红蛋白浓度，C为网织红细胞数。ns无显著差异；**p＜0.01；****＜0.0001。

图4为本发明利用SnMP治疗对小鼠脾脏的影响：A为脾脏外观，B为脾脏重量/体重相对比值统计。ns无显著差异；****＜0.0001。

图5为本发明采用酶标仪检测SnMP对小鼠血清铁浓度的影响。*p＜0.05。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明进行进一步的阐述，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。

实施例1：本实施例采用TAU凝胶电泳技术检测SnMP对小鼠外周血红细胞内α珠蛋白沉积的影响

实验步骤：

1、将年龄和性别相当的野生型(购买自湖南斯莱克景达公司)和β-地中海贫血小鼠(购买自杰克逊实验室，模型构建见参考文献)各分成2组：一组腹腔注射200μL pH7.2-7.4的磷酸盐缓冲液(PBS)，并将其作为对照组，一组腹腔注射200μL SnMP并将其作为实验组。SnMP治疗的剂量为25μmol/kg，腹腔注射3次/周次，持续打4周后，每周1次维持。

2、红细胞膜样品的准备；

1)用抗凝离心管采取小鼠血液4μL；

2)将血细胞离心并用预冷PBS洗涤1次(1mL，2000rpm，5分钟，4℃)(取上清8μL，最后加10μL TAU上样缓冲液用作电泳时的标准品)；

3)加入200μL 0.1×PBS放置冰上裂解50分钟(也可采取-80℃反复冻融2次)；

4)弃上清，用0.1×PBS冲洗沉淀2次，最高速，5分钟，4℃；

5)用10μL TAU上样缓冲液溶解沉淀。

3、TAU凝胶电泳，洗脱显影后拍照。

实验结果如图1(其中，A为TAU胶电泳染色结果，B为标准化后的各组α珠蛋白沉积电泳条带的灰度值统计)所示：SnMP处理4-6周后，地贫小鼠外周血红细胞内α珠蛋白沉积较PBS对照组有明显减少，而野生型小鼠无明显变化。说明SnMP可以针对性地改善地贫小鼠外周血α/β珠蛋白链不平衡的现象。

实施例2：本实施例采用流式细胞术检测SnMP对生物素标记后小鼠外周血红细胞半衰期的影响

实验步骤：

1、小鼠分组和治疗同实施例1；

2、抗凝离心管收集PBS/SnMP处理组小鼠外周血200μL；

3、加入300μM生物素标记溶液，轻轻混匀后避光37℃孵育60分钟；

4、标记结束后清洗细胞1遍，将标记的红细胞通过眼眶静脉注射到野生型受体小鼠体内；

5、以细胞回输受体小鼠体内24小时为起点，每隔7天取2-3μL外周血，加入藻红蛋白(PE)偶联的链霉亲和素，避光孵育半小时后上流式仪检测PE阳性细胞比例，分析结果并进行统计学分析。

实验结果如图2所示：地贫小鼠-SnMP处理组的红细胞衰变较PBS处理组明显变缓，而野生型小鼠的SnMP和PBS处理组之间无明显差异。说明SnMP处理可以有效提高并延长地贫小鼠红细胞的半衰期。

实施例3：本实施例采用血常规检测SnMP对小鼠外周血贫血指标的影响

1、小鼠分组和治疗同实施例1；

2、抗凝离心管收集PBS/SnMP处理2-6周后的小鼠外周血；

3、6倍体积血细胞分析用稀释液稀释外周血，上样血液分析仪(日本Sysmex公司)后读取数据。

实验结果如图3所示：SnMP处理4-6周，地贫小鼠外周血贫血指标红细胞数(图3中A)和血红蛋白水平(图3中B)有明显恢复；另外，地贫小鼠外周血网织红细胞数自SnMP处理2周后即有显著下降(图3中C)，并随治疗时间延长而下降。由此说明SnMP处理可以有效改善地贫小鼠的外周血贫血指标。

实施例4：本实施例观察SnMP治疗对小鼠脾脏的影响

实验步骤：

1、小鼠分组和治疗同实施例1；

2、称重小鼠并记录，解剖小鼠取出完整脾脏，称重脾脏并记录；

3、将小鼠脾脏排列在背景清晰纸面上，拍照以及数据处理，进行统计学分析，计算脾脏体重指数。

实验结果如图4所示。结果表明，经SnMP治疗4-6周后，地贫小鼠脾脏外形(图4中A)及重量(图4中B)现象显著改善，说明SnMP可以有效缓解地贫小鼠的脾脏肿大。

实施例5：本实施例采用酶标仪检测SnMP对小鼠血清铁的影响

实验步骤：

1、小鼠分组和治疗同实施例1；

2、用普通离心管收集PBS/SnMP治疗后小鼠的血清；

3、通过血清铁试剂盒(购自南京建成生物工程研究所)对小鼠血清进行相关处理，沸水浴5分钟后，以3500转/分的速度离心10分钟，取上清；

4、利用酶标仪检测上清在520nm处的吸光值，进行统计学分析，计算小鼠血清铁。

实验结果如图5所示。结果表明，经SnMP治疗4-6周后，地贫小鼠血清铁浓度显著下降，这说明SnMP可以有效缓解地贫小鼠铁超载现象。

上述虽然结合附图对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。