通过激活Notch信号传导治疗血管阻塞

本申请要求于2018年7月26日提交的名称为“通过Notch信号改进循环”的美国临时申请序列号62/703,872的优先权的权益；其内容通过引用合并于此。

本发明以政府支持在由美国国立卫生研究院授予的批准号HL075033和NS067420和由美国陆军医学研究和物资司令部授予的批准号W81XWH-16-1-0665下完成。政府拥有本发明的某些权利。

背景技术

狭窄、收缩、阻塞和/或闭塞可发生在贯穿机体的循环系统的血管中，包括在大或小动脉、细动脉、毛细血管、小静脉和静脉中。这些血管收缩和阻塞的发生可能是由于动脉粥样硬化、血栓形成、凝块、栓塞、赘生物或其他阻塞，以及其他血管异常所引起，减少对特定组织或器官的血液供应，导致循环不良、灌注不足、局部缺血和/或梗塞。当发生收缩或阻塞时，可导致需要恢复血流的疾病，包括动脉闭塞性疾病、外周动脉疾病、严重肢体缺血、跛行、颈动脉疾病、中风、小中风、脑血管疾病、心脏病、冠状动脉动脉疾病和其他血管缺血性疾病。脑中的小中风、微梗塞或灌注不足会损害器官功能，从而导致或促成病症，如痴呆、阿尔茨海默氏病或其他认知功能下降。

动脉的收缩和/或阻塞影响高达35％的美国人。随着糖尿病、高血压和处于阻塞病症风险中的老化人群的增加，除非开发有效的预防和治疗策略，否则这些疾病的发生率可能会增加。

在治疗血管阻塞、收缩、灌注不足、血流不足或其他循环不足时，目的是恢复正常血流并改进循环。当前，针对这些病症的治疗选择主要是旨在去除或打开阻塞的动脉节段的外科手术过程。例如，当前用于严重肢体缺血的治疗包括侵入性外科手术过程，例如外科血管再生、经皮血管成形术或支架放置。但是，这些过程本身固有地损坏血管。此外，许多患者可能不适合进行这些操作，而其他患者则可能需要多次重复过程。就预防性保健而言，选择包括改变生活方式，例如戒烟、增加体育锻炼和减轻体重，但这些选择仅具有可变的成功，因为它们需要患者依从性，它们间接作用于脉管系统，并且它们不改变遗传、年龄、性别、环境或其他非生活方式风险因素。

缺血性中风影响全世界数百万人，并且是许多国家的主要死亡原因。中风可以通过溶栓药物(如组织纤溶酶原激活剂(TPA))、神经保护药物和外科手术治疗。尽管这些治疗具有治疗实用性，但是与这种病症相关的死亡率、发病率和费用仍然很高，并且仍然需要用于预防和治疗中风的改进疗法。

存在许多其他与血流不足相关的医疗病症，包括涵盖血流减少的肾功能不全或肾脏疾病(包括由于动脉粥样硬化或糖尿病而引起的)、涉及血流减少的眼病(包括由于动脉粥样硬化或糖尿病而引起的)、以及由于血流阻塞引起的脾梗塞。

因此，本领域中需要新的预防和治疗选择以解决未满足医疗需求的其中涉及减少的血流的众多疾病和病症。

第一方面，本发明的范围涵盖用于改进血流或循环以治疗血流或循环不足的各种病症的新型治疗。本文公开的新发明基于以下发现：动脉血管中Notch信号传导的增加对血流或循环和组织再生以及在动脉闭塞、收缩或其他血流减少后降低组织损伤具有有益作用。动脉中Notch信号传导的增加促进有益作用，包括急性血管扩张和/或动脉生成以及副动脉生长，其中小侧支血管被重塑成闭塞周围的导管动脉，这对于恢复对缺血组织的灌注至关重要。动脉中Notch信号传导的增加增强血管的传导性并降低血管的阻力。动脉中Notch信号传导的增加也可通过其他机制起作用，导致改进的血流或循环。因此，增加动脉血管中的Notch信号传导可用于治疗许多疾病和病症，涵盖血管阻塞、收缩、血流不足或循环不足。

一方面，本发明的范围涵盖通过施用增加动脉血管中Notch信号传导的试剂来治疗特征在于血流或循环的损失或减少的病症，例如由血管阻塞或收缩引起的那些。

另一方面，本发明的范围涵盖通过施用增加动脉血管中Notch信号传导的试剂来治疗特征在于血液不足或循环不足的病症，例如局部缺血。

又另一方面，本发明的范围涵盖通过施用增加动脉血管中Notch信号传导的试剂来预防性治疗处于血管阻塞或循环受损风险的受试者。

本发明的范围还涵盖用于将Notch激活剂递送至血管的新型医疗装置。

附图说明

图1A和1B。Bmx-CreERT2介导的通过Notch1胞内域(ICD)表达的Notch信号传导的激活促进神经功能恢复，并减少远端中脑动脉闭塞(dMCAO)小鼠模型的梗塞体积。图1A：dmCAO诱导中风后，Bmx-CreERT2介导的Notch1信号传导的激活改进神经功能恢复。神经功能通过改良的Bederson等级、升高的机体摇摆测试、阶梯测试和粘性测试来评估。与对照小鼠相比，dMCAO手术后的BMX-Notch1 ICD(Bmx-CreERT2；ROSA:LNL:tTA；TRE-Notch1 ICD)小鼠表现出更好的神经功能恢复。三角形：BMX-Notch1 ICD，圆圈：对照。对照，n＝12，BMX-Notch1 ICD；n＝13。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。图1B：与对照小鼠相比，梗塞体积的定量显示BMX-Notch1 ICD小鼠中的梗塞体积明显更少(p<0.01)。每个n＝6。

图2A和2B。通过Notch4*表达的Notch信号传导的Bmx-CreERT2激活促进神经功能恢复并减少远端中脑动脉闭塞(dMCAO)小鼠模型的梗塞体积。图2A：dMCAO后，Notch4的激活改进神经功能恢复。神经功能通过改良的Bederson等级、升高的机体摇摆测试、阶梯测试和粘性测试来评估。三角形：BMX-Notch4*，圆圈：对照。图2B：与对照小鼠相比，梗塞体积的定量显示BMX-Notch4*小鼠中的梗塞体积明显更少(p<0.01)。每个n＝9。

图3A和3B。缺血性损伤后，通过Notch1 ICD表达启动的中风后Notch信号传导激活促进神经功能恢复和梗塞体积减少。图3A：缺血性损伤后Notch1的Bmx-CreERT2激活改进神经功能恢复。dMCAO后，神经功能通过改良的Bederson等级、升高的机体摇摆测试、阶梯测试和粘性测试来评估。三角形：BMX-Notch1 ICD，圆圈：对照。图3B：通过HE染色测定的梗塞体积的定量显示，与对照小鼠相比，BMX-Notch1 ICD小鼠中的梗塞体积明显更少。对照，n＝7，BMX-Notch1 ICD；n＝9。

图4A和4B。缺血性损伤后，通过Notch4*表达启动的中风后Notch信号传导激活促进神经功能恢复和梗塞体积减少。图4A：缺血性损伤后Notch4的动脉激活改进神经功能恢复。dMCAO后，神经功能通过改良的Bederson等级、升高的机体摇摆测试、阶梯测试和粘性测试来评估。三角形：BMX-Notch4*，圆圈：对照。图4B：通过HE染色测定的梗塞体积的定量显示，与对照小鼠相比，BMX-Notch4

图5A和5B。Notchl ICD的动脉表达促进侧支的生长并促进脑血流的恢复。图5A描绘了在dMCAO之前14天开始Notch1 ICD表达并在dMCAO之后14天关闭Notch1 ICD的实验方案。图5B：在实验时间过程中的副动脉直径、速度和通量，垂直线表示Notchl ICD表达关闭的时间。三角形：BMX-Notch1 ICD，圆圈：对照。

图6A、6B和6C。用Notch激活配体DLL4的处理可改进dMCAO后侧支的生长并保留脑血流，以及改进神经功能。图6A描绘了实验时间过程，其中在dMCAO中风诱导之前的一天和之后的七天施用重组DLL4。图6B：副动脉直径、速度和通量，垂直线之间的区域表示DLL4施用的时间。三角形：rDLL4，圆圈：对照。对照，n＝5，经处理；n＝5。

图7A、7B和7C。通过表达Notch4*改进肢体缺血小鼠模型的恢复。在EFAO之前的14天开始Notch 4*诱导。图7A，在EFAO后的5周内，BMX-Notch4*小鼠的血流明显更优。足灌注表示为左足(缺血)与右足(对照)之比，其通过激光多普勒灌注成像(LDPI)测量。三角形：BMX-Notch 4*，圆形：对照。数据为平均值±SEM。**p<0.01，***p<0.001。图7B：在EFAO后21天，对于对照和表达Notch4*的小鼠、BMX-Notch4*的左足和右足中的侧支动脉直径的比较。图7C，EFAO后侧支动脉直径变化率。对于每个n＝8，*P<0.05。

图8。图8描绘了Notch4*表达两周后EFAO后第7天的肌肉坏死的定量，其表明表达Notch4的突变体中坏死的统计学显著减少。

图9。EFAO后表达Notch4*14天的小鼠中的足灌注持久改进。EFAO前14天在突变小鼠的左后肢中启动Notch4表达。在EFAO之前和之后，在经处理左足和未处理右足中测量足灌注。随时间跟踪经处理和未处理的足中灌注值之比。EFAO后第14天，Notch4*表达关闭。正方形：BMX-Notch4*小鼠，圆圈：对照。

图10。EFAO后在表达Notch4*的小鼠中观察到足灌注的显著改进。通过他莫昔芬施用，Notch4*表达被诱导，随后立即是左后肢中的EFAO诱导，和EAFO后一天(箭头)。在EFAO之前和之后，在手术的左侧足和未手术的右侧足中测量足灌注。图10描绘了经处理和未处理足的左和右灌注值之比随时间的变化。正方形：BMX-Notch4*，圆形：对照。

本发明的范围涵盖通过施用激活血管中Notch信号传导的试剂来治疗血管疾病。在一个实施方案中，本发明的范围涵盖用于治疗血管疾病的激活血管中Notch信号传导的试剂。在相关实施方案中，本发明的范围涵盖通过施用药学有效量的激活血管中Notch信号传导的试剂来治疗需要治疗的受试者的血管疾病的方法。在相关实施方案中，本发明的范围涵盖使用激活血管中Notch信号传导的试剂用于制备治疗血管阻塞或收缩病症的药物的方法。接下来描述本发明的各种特征。

治疗。本发明的各种实施方案涉及如下定义的血管疾病的治疗。如本文所用，“治疗”将涵盖任何预防性或治疗性治疗。在第一方面，“治疗”将涵盖针对一种或多种血管疾病引起治疗效果，包括例如：抑制成为血管疾病基础的过程；改善血管疾病的症状；减缓血管疾病的发展；降低血管疾病的严重性；和治愈血管疾病。

在一些实施方案中，本文所用的“治疗”将涵盖预防性治疗，例如，实现以下一种或多种的治疗：预防血管疾病的发作；延迟、减缓或阻止血管疾病的进展；改进血管循环或健康；降低发生血管疾病的风险；减缓或阻止缺血性疾病的进展；和增加或恢复血管中的Notch信号传导。

在一些实施方案中，本文所用的“治疗”是指实现一种或多种生理、物理、功能、治疗或表现结果。例如，治疗可以涵盖：增加一根或多根血管中的Notch信号传导；通过一根或多根血管改进血流或循环；促进动脉生成；扩张一根或多根血管；增强一根或多根血管的电导；减少一根或多根血管的阻力；和改进一根或多根血管的血管张力。

本发明的治疗可以实现局部作用，例如改进局部缺血部位或器官的血流，或可以实现全身作用，例如改进全身的总体循环。

血管疾病。本发明的各种实施方案涉及治疗血管疾病。如本文所用，“血管疾病”可包括任何疾病、病症或病状，包括急性和慢性疾病，其中一根或多根血管中血流减少、阻碍或阻塞。血管疾病可以包含构成血流减少、阻碍或阻塞的疾病。血管疾病还可包含导致或减少、阻碍或阻塞血流的疾病。

一方面，血管疾病是局部缺血。在一个实施方案中，局部缺血是心脏局部缺血，也称为冠状动脉疾病，也称为局部缺血性心脏病。心脏缺血涵盖稳定型心绞痛、不稳定型心绞痛、急性冠脉综合征、心绞痛、心肌梗塞和动脉粥样硬化引起的局部缺血。

一方面，血管疾病是脑缺血。在一个实施方案中，脑缺血是急性缺血性中风。在一个实施方案中，脑缺血是短暂性脑缺血发作或小中风。在一个实施方案中，脑缺血为或微梗塞。在一个实施方案中，脑缺血是血管性痴呆。在一个实施方案中，血管疾病是脑血管疾病。在一个实施方案中，血管疾病是涵盖脑中循环减少的疾病，包括例如痴呆、阿尔茨海默氏病或其他认知功能下降。

在一个实施方案中，血管疾病是肢体缺血。在一个实施方案中，肢体缺血是严重肢体缺血。

在一个实施方案中，血管疾病是肠缺血。

在一个实施方案中，血管疾病是颈动脉疾病。

在一个实施方案中，血管疾病是外周动脉疾病。在一个实施方案中，该外周动脉疾病是严重肢体缺血。在一个实施方案中，该外周动脉疾病是跛行。

在一个实施方案中，血管疾病是涵盖血流减少的肾功能不全或肾脏疾病，包括由于动脉粥样硬化或糖尿病而引起的。

在一个实施方案中，血管疾病是涉及血流减少的眼睛疾病，包括由于动脉粥样硬化或糖尿病而引起的。

在一个实施方案中，血管疾病涉及脾中的血流减少，包括由于血流阻塞而引起的脾梗塞。

在一个实施方案中，血管疾病是肠系膜动脉闭塞或肠梗阻。

在一个实施方案中，血管疾病是烟雾病。

在一个实施方案中，血管疾病是具有皮层下梗塞和白质脑病的脑常染色体显性遗传动脉病，有时称为CADASIL。

在一个实施方案中，血管疾病是Alagille综合症或Alagille-Watson综合症，包括其遗传或自发形式，例如显现在肝脏、心脏、肾脏和机体的其他系统中。ALGS由JAG1或NOTCH2中的功能突变丧失引起。

在一个实施方案中，血管疾病为小血管病、小血管梗塞或白质病。

在一个实施方案中，血管疾病是在接收移植组织(如肾脏、肝脏、肺、心脏、细胞移植物)之后建立或改进血流的需要。

在一个实施方案中，血管疾病是在再生组织区域中建立或改进血流的需要。

本发明的方法尤其适合于治疗血管中的血管阻塞或收缩。在一个实施方案中，血管疾病是涵盖小动脉或细动脉中循环减少的疾病，其中它还可以引起循环不良并损害器官功能。在其他实施方案中，血管疾病显现在静脉、毛细血管或移植的血管中。

在一个实施方案中，血管疾病是机体任何部分的动脉闭塞性疾病。在一个实施方案中，血管疾病是灌注不足。在一个实施方案中，血管疾病是动脉粥样硬化。在一个实施方案中，血管疾病是血栓形成。在一个实施方案中，血管疾病是凝块的形成或持久存在。在一个实施方案中，血管疾病是栓塞。在一个实施方案中，血管疾病是肺栓塞。在一个实施方案中，血管疾病是血管的赘生物或其他阻塞。

受试者。本发明的方法应用于治疗受试者。受试者将是需要治疗血管疾病的受试者，例如患有血管疾病或处于血管疾病风险的受试者。受试者可以是任何动物，例如人受试者、非人灵长类动物、小鼠、大鼠、其他啮齿动物、狗、猫、牛、猪、马或任何其他动物物种。在一个实施方案中，受试者是人患者。在一个实施方案中，受试者是兽医受试者。在一个实施方案中，受试者是测试动物。

在一个实施方案中，所述受试者是处于血管疾病风险的受试者。在一个实施方案中，处于血管疾病风险的受试者是老年受试者。例如，对于人受试者，老年受试者可以是至少40岁、至少45岁、至少50岁、至少55岁、至少60岁、至少65岁、至少70岁、至少80岁或更老。在其他实施方案中，处于血管疾病风险的受试者是吸烟者或曾吸烟者。在其他实施方案中，处于血管疾病风险的受试者是具有血管疾病的医学或家族病史的受试者。在其他实施方案中，处于血管疾病风险的受试者是例如其BMI大于25或大于30的超重或肥胖者。在一个实施方案中，处于风险的受试者为患有糖尿病的受试者。在一个实施方案中，处于风险的受试者是患有高血压的受试者。

Notch信号传导激活。本发明的范围涵盖作为Notch信号传导的激活剂的试剂的用途。Notch受体是单程跨膜受体蛋白。哺乳动物Notch受体涵盖Notch1、Notch2、Notch3和Notch4，其中Notch1和Notch4在动脉内皮细胞中表达。

Notch途径介导细胞间信号传导，通过该信号传导调控神经元、血管、心脏、免疫、内分泌发育和其他过程中的一系列细胞命运决定。在Notch信号传导中，细胞表面的Notch受体与相邻细胞表面上存在的跨膜配体相互作用。然后，配体结合导致Notch受体的一系列蛋白水解切割，从而从膜中释放Notch胞内结构域(ICD)。ICD易位进入细胞核，在其中其与哺乳动物的核蛋白(CSL蛋白CBF-1/RBPJ)一起进入复合体，以调控各种靶基因的转录。通过RBPJ，Notch激活经典信号传导。Notch还通过其他下游效应子激活非经典信号传导。

如本文所用，“Notch的激活”或“Notch激活”，在本文中指的“Notch信号传导的激活”，其涵盖本领域已知的任何Notch信号传导活性或效应(经典或非经典)的诱导、增加或上调。本文所指的Notch信号传导的激活包括增强现有内源性Notch活性、恢复正常内源性Notch活性以及增强和增加动脉血管中的Notch活性。Notch信号传导可例如涵盖：切割Notch以释放ICD，ICD易位至核，增加TNF-αADAM金属蛋白酶转化酶(TACE)活性；通过Mib增加切割的Notch胞外结构域的泛素化，增加Notch胞内结构域的γ-分泌酶介导的释放，增强CBF1/Su(H)/Lag-1转录因子复合物的形成或活性；和/或调节与内部Notch活性一致的Notch下游基因(通过ICD或通过绕过和模拟ICD的一种或多种作用的试剂)。下游基因包括Deltex-1、Deltex-2、Deltex-3、Deltex抑制子(SuDx)、Numb及其亚型、Numb相关激酶(NAK)、Notchless、Disheveled(Dsh)、emb5、边缘基因(如Radical、Lunatic和Manic)、PON、LNX、Disabled、Numblike、Nur77、NFkB2、Mirror、Warthog、Engrailed-1和Engrailed-2、Lip-1及其同源物、涉及由Deltex调节的Ras/MAPK级联的多肽、Epherin-B2、Myc、p21和HES家族成员、ephrin-B2、Eph-B4、连接蛋白40、FBW7和其他Notch靶基因。Notch信号传导激活最终导致下游靶基因的基因表达变化(上调或下调)。

Notch激活将进一步涵盖，例如，靶细胞中Notch活性的增加；靶细胞中Notch基因或蛋白质、Notch配体基因或蛋白质、Notch正调控基因或蛋白质、Notch信号传导介导基因或蛋白质、Notch信号调节基因或蛋白质或Notch下游靶标的表达增加；Notch信号传导的上调；Notch激活的下游物质或效应子的表达或活性增加；无论作用方式如何，都在靶细胞中以有益的方式发生的Notch信号传导的负调节剂的抑制或Notch信号传导的任何其他增加。

如本文所用，Notch激活将涵盖Notch信号传导途径的任何激活，包括由Notch 1、Notch 2、Notch 3和Notch 4介导通过经典或非经典信号传导的途径。在一个主要实施方案中，由于Notch 1和Notch 4是主要在动脉内皮细胞中表达的亚型，Notch激活将指Notch 1和/或Notch 4激活。

如本文所用，Notch激活将涵盖机体任何细胞类型中的Notch信号传导激活。在一个主要实施方案中，Notch信号传导激活将指血管细胞(包括血管内皮或平滑肌细胞)中的Notch信号传导途径的激活。在一个主要实施方案中，Notch信号传导激活将指动脉细胞(如动脉内皮细胞)中Notch信号传导途径的激活。不受任何特定理论的束缚，据信血管内皮细胞中Notch激活是主要负责本文所述的治疗效果。但是，应当理解，Notch激活的治疗效果可以由其他细胞类型(如平滑肌细胞或血细胞)或在机体的其他区域中的Notch激活产生，并且本发明的范围不限于动脉内皮细胞中Notch激活的治疗效果。

Notch激活剂。本发明的范围涵盖施用Notch激活剂。Notch激活剂包括能增加机体细胞(例如血管内皮细胞、例如动脉内皮细胞)中的Notch信号传导的任何物质的组合物。Notch激活剂可包含具有Notch激活活性的任何试剂，包括例如抗体、小分子、肽和蛋白质以及核酸。

在一个实施方案中，Notch激活剂是小分子。示例性的小分子Notch激动剂包括N-methylhemeanthidine chloride、丙戊酸、白藜芦醇、三乙酰基白藜芦醇、异硫氰酸苯乙基酯和Yhhu-3792，以及前述的Notch激活化学类似物和变体。

在一个实施方案中，Notch激活剂是肽或蛋白质。在第一个实施方案中，肽或蛋白质是Notch配体，即在细胞表面上体内表达并且与Notch相互作用并在结合Notch胞外结构域时激活Notch信号传导的物质。Notch配体包括任何哺乳动物的Notch配体，例如Delta样配体，包括Delta样配体1(DLL1)、Delta样配体2(DLL2)、Delta样3(DLL3)、Delta样配体4(DLL4)。Notch配体还包括哺乳动物的Jagged配体Jagged-1和Jagged-2。Notch配体可以进一步包含非哺乳动物Notch配体或其变体，例如，Delta蛋白、Serrate家族蛋白(包括Serrate-1和Serrate-2)和LAG-2。

所述Notch配体可包含已知Notch配体的变体，例如与Notch配体具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％的序列同一性，同时保持或增强Notch激活活性的蛋白质。Notch配体变体还可包含野生型蛋白的截短。例如，在一个实施方案中，Notch激活配体变体包含高度保守的Jagged 1delta/Serrate/Lag-2(DSL)结构域。在另一个实施方案中，Notch激活配体变体包含人Jagged 1的氨基酸残基188-204，其已表明具有Notch激活活性，例如如Kannan et al.(2013)Notch activation inhibits AMLgrowth and survival:a potential therapeutic approach.J Exp Med 210:321-337所描述的。野生型DLL配体包含八个表皮生长因子样(EGF样)序列重复序列，而野生型Jagged配体包含十二个EGF样重复序列。与野生型序列相比，本发明的Notch配体变体可包含具有改变的EGF样序列重复序列数目的DLL或Jagged的变体。此外，Notch配体变体可包含由两种或多种配体类型的亚基组成的杂合蛋白，例如如Tveriakhina et al.,The ectodomainsdetermine ligand function in vivo and selectivity of DLL1 and DLL4 towardNOTCH1 and NOTCH2 in vitro eLife 2018；7:e40045所描述。例如，在一个实施方案中，Notch配体变体包含N端MNNL和DSL结构域以及DLL1、DLL2、DLL3、DLL4、Jagged 1或Jagged 2的相邻EGF重复序列1-3。在另一实施方案中，Notch配体变体包含DLL4突变体，该DLL4突变体在257位包含脯氨酸取代的精氨酸，如Liu et al.,Identification of Domains forEfficient Notch Signaling Activity in Immobilized Notch Ligand Proteins,JCell Biochem 2017Apr；118(4):785-796所描述的。

在一个实施方案中，Notch的肽或蛋白质激活剂是Notch配体模拟物，包括工程化变体和从头合成的分子，其包含具有Notch激活活性的氨基酸序列、肽和蛋白质。例如，工程化变体可以包含Notch配体的配体结合结构域及其例如被改变以具有增加的活性的其他活性结构域。

在一个实施方案中，Notch的肽或蛋白质激活剂是Notch ICD，例如Notch 1、Notch2、Notch 3或Notch 4ICD。可以将ICD融合或缀合至用于膜内或跨膜运输的载体，例如促进跨膜运输的脂质载体或肽物质。例如，ICD可以与转录反式激活因子(TAT)肽、渗透素、胆固醇依赖性溶血素或其他细胞渗透肽融合。

在一个实施方案中，Notch激活肽或蛋白质包含抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体结合Notch并启动ICD切割和/或Notch激活。例如，在一个实施方案中，Notch激活剂包含抗体A13，其如Li et al.,Modulation of Notch Signaling by Antibodies Specificfor the Extracellular Negative Regulatory Region of NOTCH3,J Bio Chem 283:8046-8054,2008所描述。

在一个实施方案中，Notch激活剂包括脂质。Jagged和DLL配体包含脂质结合基序，其中某些脂质的结合可调节Notch激活。在一个实施方案中，具有Notch激活活性的脂质是结合Notch或Notch配体的脂质。例如，在一个实施方案中，Notch激活脂质包括1-磷酸鞘氨醇(S1P)。类似地，可以使用S1P受体3蛋白。

在一个实施方案中，Notch激活剂是核酸，例如遗传构建体，其被递送至靶细胞并由此类细胞表达。在一个实施方案中，Notch激活剂是编码Notch激活蛋白或Notch信号传导的下游效应子的核酸构建体。在一个实施方案中，构建体编码Notch受体(例如，Notch 1、Notch 2、Notch3或Notch 4)。在一个实施方案中，Notch受体是Notch4*，如本文所用，其表示的Notch Flk1/int-3等位基因是本领域已知的功能获得型Notch4突变突变体，其产生Notch 4蛋白，其中表达后，胞内结构域被组成性切割。在一个实施方案中，构建体编码Notch胞内结构域，例如，缺少胞外结构域，例如Notch 1或Notch 4胞内结构域。在一个实施方案中，构建体编码Notch配体，例如DLL1、DLL2、DLL3、DLL4、Jagged 1、Jagged 2或Notch配体的变体。

Notch激活基因构建体可包含任何类型的表达载体，包括例如通过基因治疗技术递送的基因构建体：病毒载体(例如腺病毒或腺相关病毒，慢病毒)、成簇规则间隔的短回文重复相关核酸酶系统(CRISPR/Cas)型构建体、CRISPRa、纳米颗粒介导的基因递送(例如树状聚合物、脂质、壳聚糖基因递送颗粒等)或本领域已知的任何其他基因治疗构建体。基因构建体可以进一步包含用于Notch激活剂表达的高水平的组成型启动子或用于Notch信号传导途径中的基因的受控表达的诱导型启动子。启动子可以是组织特异性启动子，例如人的动脉特异性启动子，启动子如fms样酪氨酸激酶-1(FLT-1)、细胞间粘附分子-2(ICAM-2)和von Willebrand因子(vWF)启动子、DLL4、Notch1、Notch4、连接蛋白40、连接蛋白43、连接蛋白37。在鼠受试者中，可以使用启动子如BMX。

在一个实施方案中，Notch激活剂是Notch的负调节剂的抑制剂，例如泛素连接酶RNF8、NUMB、SEL-10和FBW7的抑制剂。抑制剂可以是小分子、肽、氨基酸或其他物质组成，其下调或抑制Notch激活的负调节剂，并且其中抑制负调节剂引起Notch信号传导的诱导或增加。

在一个实施方案中，Notch激活剂是影响Notch激活的RNA，如可以增加Notch信号传导的microRNA、RNAi构建体、短发卡RNA或其他RNA序列。例如，RNA可以包含抑制Notch信号传导的负调节剂的表达或活性的microRNA或其他RNA。RNA构建体可以包含用于表达Notch激活蛋白的瞬时表达载体。

核酸构建体向靶细胞(例如动脉的内皮细胞)的递送可通过本领域已知的任何方式来实现。例如，可以通过病毒基因载体、电穿孔、生物弹药递送系统、显微注射、超声、流体动力递送、脂质体递送、基于聚合物或蛋白质的阳离子试剂(例如聚乙烯亚胺、聚赖氨酸)、注射系统和DNA递送树状聚合物来实现递送。基因递送可以是全身性的(例如静脉内)，或局部的，例如通过局部注射，通过导管(例如药物洗脱球囊导管)或通过药物洗脱植入物(例如支架)递送。也可以使用脂质体递送系统。[00]例如，通过将待表达的转基因递送入血管组织的方法。用于靶向递送至血管的方法可以根据本领域已知的方法来调整，例如，描述于Meininger的美国专利申请公开号20050053590，名称为“Endothelium-targetingnanoparticle for reversing endothelial dysfunction”、Yu等人的PCT国际专利申请公开号2002042426，名称为“Carrier system for specific artery wall gene delivery”以及Coleman等人的美国专利申请公开号20090209630，名称为“Gene deliveryformulations and methods for treatment of ischemic conditions”的那些。

在一个实施方案中，Notch激活剂是基于草药或植物的组合物。例如，雨百合(Zephyranthes Candida)提取物具有Notch激活分子N-methylhemeanthidine chloride，如Ye et al.,Small molecule activation of NOTCH signaling inhibits acutemyeloid leukemia Scientific Reports volume 6,Article number:26510所描述的。

Notch激活剂的构建体、制剂和施用。可以配置和配制本发明的Notch激活剂以增强功效，并且可以与装置或其他试剂组合。

如本领域已知，本发明的Notch激活剂可以与药学上可接受的赋形剂、载体、稀释剂、释放制剂和其他药物递送载体组合施用。

本发明的Notch激活剂可包括靶向部分，其是将Notch激活物质靶向靶血管细胞的物质的组合物。在一些实施方案中，本发明的方法应用于包括动脉和小动脉的任何动脉血管中。在一个实施方案中，本发明的方法包括施用可以在动脉细胞(包括动脉内皮细胞)中选择性或优先增加Notch信号传导的试剂。在动脉细胞中选择性或优先增加Notch信号传导可涵盖增强的Notch信号传导，其靶向动脉细胞，在非动脉血管和其他非靶组织中不重要或不存在，或者在动脉细胞中比在非动脉血管中具有更大幅度或持续时间。

靶血管细胞可以进一步包括其他血管类型(如静脉)中的其他血管细胞，包括内皮细胞、平滑肌细胞和血细胞。例如，与在应激或炎症过程中出现的配体结合的靶向部分可用于将Notch激活剂靶向疾病或受损的内皮细胞。示例性的靶向部分包括，例如，白细胞粘附分子、LDL和衍生的磷脂。血管(例如动脉血管)中存在的其他配体可用于将Notch激活剂靶向相关细胞类型。

在一些实施方案中，Notch激活剂基本上在不含赋形剂的缓冲液、盐水或水中单独递送。有利地，如实施例部分中所述，静脉内递送的Notch激活剂似乎主要激活动脉内皮中的Notch，而不存在特定的靶向部分。

在一些实施方案中，Notch激活剂由脂质体递送。脂质体递送系统适合于递送核酸、肽和其他试剂。试剂的动脉输送例如描述于Hwang et al.,Improving Cerebral BloodFlow Through Liposomal Delivery of Angiogenic Peptides:Potential of

在一些实施方案中，可以利用本领域已知的微泡递送方法，包括超声介导的微泡递送，用于位点特异性递送。

在一些实施方案中，如本领域所已知，Notch激活剂由负载纳米颗粒的膜递送，例如包裹在靶血管周围的膜。

在一些实施方案中，所述Notch激活剂通过药物-抗体缀合技术递送，其中所述Notch激活剂缀合至抗体或其抗原结合片段(如通过噬菌体展示产生的结合片段)，其中所述抗体或抗原结合片段选择性结合动脉或其他靶细胞类型中存在的配体。例如，靶向部分可以针对CD34、粘附分子1和其他动脉配体，例如，在受损血管中发现的配体(如交联的纤维蛋白)。

在一个实施方案中，Notch激活剂包括化学缀合至可磁化的微粒或纳米颗粒(例如，氧化铁、氧化铁铁)的Notch激活组合物，用于本领域已知的磁性定向药物递送方法。

在一些实施方案中，靶向部分和Notch激活组合物均为蛋白质或肽。在此实施方案中，Notch激活剂包括融合蛋白，其包含靶向部分和Notch激活蛋白或肽。

在一种实施方案中，将本发明的Notch激活剂涂覆、缀合或以其他方式存在于装置上。如本领域中已知的，可以通过经导管递送将装置递送到目标部位。

在一种实施方案中，如本领域已知的，可以用与聚合物材料混合的Notch激活剂的制剂涂覆装置，以用于试剂的定时释放洗脱。示例性的药物洗脱聚合物可以包括本领域已知的材料，如聚氨酯、多克隆、聚甲基丙烯酸甲酯、聚乙烯醇和聚乙烯。在另一个实施方案中，将Notch激活剂直接缀合到装置的表面上。

例如，在一个实施方案中，装置可以包括植入物。在一个实施方案中，植入物可包括支架。支架可以是金属支架或聚合物支架，例如可生物降解或可吸收的聚合物支架。

在一个实施例中，装置可包括如本领域已知的药物涂覆的球囊。药物涂覆的球囊包括从导管上展开的聚合物球囊，例如一旦借助放射线照相成像而定位，球囊膨胀，从而使其接触血管壁，并使血管壁暴露于涂覆在球囊外侧的试剂，所述试剂典型地在载体或赋形剂中，例如聚山梨酸酯、山梨醇、碘普罗胺、丁酰柠檬酸三己酯(BTHC)、乙二醛酸和虫胶酸中。可以将球囊放置一段时间以有效地转移到动脉壁。

在一些实施方案中，将Notch激活剂配制在药物递送颗粒组合物(如微球、纳米球、纳米颗粒、囊泡、合成外泌体和其他药物递送颗粒)之内或之上。

在一种实施方案中，将Notch激活剂缀合至红细胞、血小板或红细胞或血小板的合成模拟物。红细胞修饰方法是本领域已知的，包括例如描述于Shi et al.,Engineered redblood cells as carriers for systemic delivery of a wide array of functionalprobes,PNAS 2014 28:10131-10136。类似地，可使用功能性血小板，例如如Lu et.al.,Platelet for Drug Delivery 2014,Curr Op Biotech 58:81-91所综述。

可以将Notch激活剂与任何其他治疗组合物联合施用，例如：血栓溶解药，例如组织纤溶酶原激活剂；神经保护药；降压药；抗惊厥药；肾上腺素受体拮抗剂；和其他用于治疗缺血或其他血管疾病的药物。

Notch激活剂的施用。在本发明的治疗中，将Notch激活剂以药学有效量递送至体内的一个或多个位点，以治疗所选的血管疾病。药学有效量是足以诱导可测量的治疗效果或可测量的Notch信号传导活性的任何量。

施用方法和时机将基于各种因素选择：所讨论的血管疾病；血管疾病的发展和状况；受试者的状况；所选Notch激活剂的物理和药理特性；和递送方式。

例如，可以进行Notch激活剂的局部或全身递送。在一种实施方案中，例如实现了向循环系统的全身施用。在预防性治疗的情况下，例如为了在处于血管疾病风险的受试者中增强动脉弹性，例如在老年受试者中预防性治疗缺血或另一种血管疾病，全身施用可能是理想的。当Notch激活剂具有最小或可接受的脱靶效应时，也可以进行全身递送。在其他情况下，例如在治疗急性损伤、闭塞或其他局部病症时，例如其中导管或其他装置难以进入狭窄区域的情况下，局部递送是优选的。

例如，在预防性治疗以产生或维持降低的血管疾病风险的情况下，或在治疗慢性病中，试剂的施用可以是长期的。施用可以是短期的，例如在急性血管疾病(如局部缺血)的治疗中。

在一个主要实施方案中，考虑到靶细胞是血管细胞，则Notch激活剂的施用将通过静脉内途径进行。在替代实施方案中，施用可以是口服、局部、通过腹膜内注射或与所选Notch激活剂相容。

在第一个实施方案中，通过静脉内注射全身施用Notch激活剂。在这种情况下，试剂容易暴露于循环系统的靶内皮细胞。这种施用途径有利地使得能够递送到体内深处的血管，或者另外地该血管不易通过外科手术介入。

在替代实施方案中，Notch激活剂例如通过注射到患病的血管中而局部递送。例如，可以将Notch激活剂递送到就在患病区域的上游和/或下游或在患病区域之内的脉管的部分，例如闭塞的部分或梗塞。

在一个实施方案中，通过引入血管中的导管或类似装置将Notch激活剂局部递送至患病的血管。Notch激活剂可以从导管中流出或分配，或者可以存在于导管表面上，或存在于由导管递送到患病位点的药物洗脱结构(例如球囊)中。

在另一个实施方案中，将Notch激活剂与外科植入物联合施用。例如，在一个实施方案中，将Notch激活剂施用在支架或其他植入物上，其中用药物洗脱递送载体或制剂中的Notch激活剂涂覆该植入物。

适当的剂量和治疗方案将变化并且可以根据患者、疾病、试剂和递送因素由本领域技术人员选择。可以施用1纳摩尔-100微摩尔的示例性剂量，例如每天每千克体重1-1000微克试剂的剂量，例如每天每千克体重约50-100微克试剂的剂量。可以例如在药物洗脱泵或装置的情况下，每天多次、天天、每隔一天或每周或连续地，施用剂量。剂量可以施用几天、几周、几月或更长时间。

具体实施方案

实施例1.具有可诱导的动脉Notch信号传导的小鼠。为了研究Notch信号传导在缺血小鼠模型中的作用，使用Notch1和Notch4的组成型活性形式，分别表示为Notch1 ICD和Notch4*。Notch1 ICD包含没有跨膜或胞外域的截短的Notch1受体胞内域(ICD)，在功能上复制被切割的Notch胞内域，并且在表达时具有组成型活性。Notch4*突变体包含具有跨膜和胞内结构域但没有胞外结构域的截短的Notch4受体，并且其被组成型切割为Notch4ICD。因此，Notch4*在表达时在功能上具有组成型活性。因此，当在细胞中表达时，Notch1ICD或Notch4*增加Notch信号传导。

将这两个突变体Notch基因的表达置于四环素(Tet)响应元件(TRE)下，该元件在四环素(tet)-OFF基因表达系统中由tet反式激活因子(tTA)，TRE-Notch1 ICD和TRE-Notch4*激活。tTA在ROSA:LNL:tTA等位基因中Cre激活后表达。因此，Notch1 ICD和Notch4*的表达在Bmx(PAC)-CreER

携带Bmx(PAC)-CreER

在表达Notch4*的小鼠中，肢体中的Notch4*染色研究表明Notch4*与血管内皮细胞共定位，但不能排除Notch4*在其他细胞类型中的表达。

Rosa26-mT/mG报告基因产生的靶向膜的绿色荧光蛋白的检测显示，Bmx(PAC)-CreER

实施例2.通过Notch1胞内域(ICD)表达的Notch信号传导的动脉激活促进缺血性中风小鼠模型中的恢复。如本领域所已知，在通过dMCAO过程诱导的实验性中风之前14天和13天，通过施用他莫昔芬在BMX-Notch1 ICD小鼠中诱导Notch1 ICD表达。使对照和BMX-Notch1小鼠经历dMCAO程序。在dMCAO之前和之后测试神经功能。dMCAO后，Notch1的动脉激活改进神经功能恢复。评估神经功能(图1A)，包括通过改良的Bederson等级、升高的机体摇摆测试、阶梯测试和粘性测试。与对照小鼠相比，dMCAO手术后BMX-Notch1 ICD小鼠表现出更好的神经功能恢复。与对照小鼠相比，H&E染色显示BMX-Notch1 ICD小鼠的梗死灶更少。与对照小鼠相比，梗塞体积的定量显示BMX-Notch1 ICD小鼠中梗塞体积明显更少(p<0.01)(图1B)。

此外，与对照小鼠相比，BMX-Notch1 ICD小鼠脑中动脉的血管铸模[去除所有软膜(pial)]显示更明显的侧支(大脑前动脉-大脑中动脉吻合术)重塑。尽管在BMX-Notch1 ICD和对照小鼠中均观察到dMCAO同侧的侧支重塑，但在BMX-Notch1 ICD小鼠中，血管数目、直径和弯曲度的重塑程度更加明显。放大图清楚地表明，与对照小鼠相比，表达BMX-Notch1ICD的小鼠中的软膜侧支更加明显和曲折。

在Notch4信号传导的动脉激活中观察到相似的结果。Notch4*表达促进dMCAO模型小鼠的神经功能恢复，并减少梗死体积。dMCAO后，Notch4的动脉激活改进神经功能恢复。评估神经功能(图2A)，包括通过改良的Bederson等级、升高的机体摇摆测试、阶梯测试和粘性测试。与对照组小鼠相比，H&E染色显示BMX-Notch4*小鼠的梗死灶更少。与对照小鼠相比，梗塞体积的定量显示BMX-Notch4*小鼠中梗塞体积明显更少(p<0.01)(图2B)。

与对照小鼠相比，BMX-Notch4*小鼠中动脉的血管铸模显示更明显的侧支重塑。放大图清楚地表明，与对照小鼠相比，BMX-Notch4*小鼠中侧支更加明显和曲折。

这些结果表明，在急性缺血性中风之前和之后，Notch信号传导的诱导可极大改进损伤小鼠的恢复，并且具有更大的血流恢复和减少的梗塞体积。该数据表明了预防作用以及治疗作用。

实施例3.局部缺血后Notch信号传导活化促进神经功能恢复、梗塞体积减少和侧支动脉生长增加。

之前的结果表明，在损伤之前和之后激活Notch信号传导可实现脑中缺血性损伤后的改进的结果。为了证明该效果可以在损伤后的治疗环境中应用，进行其中在缺血性损伤后诱导Notch激活的实验。在这些试验中，使对照组和突变Notch小鼠经历dMCAO，然后通过他莫昔芬施用诱导Notch ICD表达。为了确定中风发作后Notch信号传导的激活，在dMCAO手术后连续两天注射他莫昔芬(2mg/机体，ip)。

缺血性损伤后Notch1的动脉激活改进神经功能恢复。在dMCAO缺血性损伤之前和之后，评估神经功能(图3A)，包括通过改良的Bederson等级、升高的机体摇摆测试、阶梯测试和粘性测试。与对照小鼠相比，BMX-Notch1 ICD小鼠表现出明显更好的神经功能恢复。由于中风后逐渐获得Notch1信号传导，所以两组之间的差异从中风后7天开始变得显著。H&E染色显示，与对照组相比，BMX-Notch1 ICD小鼠(其中中风后诱导Notch1信号传导上调)的梗死灶更少。通过H&E染色测定的梗塞体积的定量显示，与对照小鼠相比，BMX-Notchl ICD小鼠的梗塞体积明显更少(图3B)。

与对照小鼠相比，当实验性中风后表达Notch1 ICD时，动脉血管铸模的图像表明BMX-Notch1 ICD小鼠中更明显的侧支重塑。图像清楚地表明，与对照小鼠相比，BMX-Notch1ICD小鼠的侧支更加明显和曲折。

类似地，缺血性损伤后启动的缺血后Notch4信号传导激活促进神经功能恢复、梗塞体积减少和侧支动脉生长改进。评估神经功能(图4A)，包括在MCAO之前和之后通过改良的Bederson等级、升高的机体摇摆测试、阶梯测试和粘性测试。通过他莫昔芬注射在缺血性损伤后诱导Notch4的动脉活化。在BMX-Notch4*小鼠中观察到神经功能恢复显著改进。由于中风后逐渐获得Notch4信号传导激活，因此两组之间的差异从中风后7天开始变得显著。与对照组小鼠相比，HE染色显示BMX-Notch4*小鼠(其中中风后获得上调的Notch4信号传导)的梗死灶较少。通过H&E染色测定的梗塞体积的定量显示BMX-Notch4*小鼠的梗塞体积明显更少(图4B)。

实施例4.瞬时Notch信号传导诱导对缺血后恢复的持久作用。为了进一步研究脑缺血性损伤后Notch信号上调的影响，进行了如图5A所总结的实验。在dMCAO之前的14天，通过施用他莫昔芬在BMX-Notch1小鼠中诱导Notch信号传导。dMCAO后14天，通过Tet-OFF表达构建体和施用强力霉素来关闭Notch1 ICD表达。

尽管关闭了Notchl ICD，但Notchl ICD的动脉表达促进侧支的生长，并保留脑血流。

与对照小鼠相比，BMX-Notch1 ICD小鼠的侧支动脉直径、速度和通量(图5B)均得到改进。关闭Notch1 ICD后，血管大小和功能的显著改进持续存在，表明Notch激活在损伤后时期内产生持久的治疗效果。

类似地，尽管dMCAO后14天Notch4*表达关闭，但与对照小鼠相比，BMX-Notch4*小鼠的血管铸模显示的更明显的侧支重塑得以维持。放大图清楚表明，与对照组小鼠相比，BMX-Notch4*小鼠中更加明显和曲折的侧支在Notch4*表达关闭后很长一段时间内得以维持。

实施例5.通过施用Notch配体的Notch信号传导激活的治疗作用。

前述实验通过基因途径证实Notch信号传导在缺血性脑损伤中的治疗作用。为了进一步证实缺血性脑损伤后Notch信号传导上调的治疗效果，从dMCAO的前一天起的八天每天向野生型小鼠(C57BL/6J系)施用重组小鼠DLL4，前三剂的剂量为每克体重1微克，并且此后每天0.8微克，如图6A所总结。损伤后第7和14天评估侧支动脉的大小和功能。在用rDLL4处理的小鼠中，在第7天，侧支动脉直径、速度和通量(图6B)显著改进，此时停止施用rDLL4。第14天，处理小鼠的显著改进得以持续。如第15天和第17天通过阶梯测试评估的，处理小鼠中的神经功能更高(图6C)。

这些结果表明，Notch信号传导激活剂的外源应用可以在治疗缺血性损伤方面具有实质性和持久的治疗作用。

实施例6.Notch信号传导的上调改进急性肢体缺血模型的恢复。

为了研究动脉Notch信号传导在急性肢体缺血中的治疗潜力，对BMX-Notch4*小鼠和对照小鼠在左后肢进行实验性股动脉闭塞(EFAO)。在FFAO之前14天，通过施用他莫昔芬诱导BMX-Notch4*小鼠中的Notch4*表达。EFAO后，测量手术和未手术肢体的足血流和后肢动脉直径。图7A描绘了表达Notch4*的小鼠的缺血足中的改进的血流。图7B描绘了在BMX-Notch4*小鼠中后肢动脉直径的改进的恢复，而在未手术的肢体中未观察到脱靶效应。图7C描绘了EFAO之后手术和未手术的肢体之间的侧支动脉直径变化的比率。图8描绘了EFAO后第7天，BMX-Notch4*小鼠中的肌肉坏死明显减少。[00]在相关实验中，通过使BMX-Notch4*小鼠和对照小鼠的一只肢体经历EFAO，在急性肢体缺血模型中研究Notch4激活的持续作用。在EFAO过程之前的13天和14天，向BMX Notch4*小鼠注射他莫昔芬以诱导Notch4*表达。EFAO后第十四天，通过施用强力霉素(在食物中)来关闭Notch4*表达。施用强力霉素后几天，Notch4*表达可能降低。在手术损伤之前和之后，如本领域中已知的，通过激光多普勒灌注成像或LDPI来测量手术和未手术肢体中的足灌注。手术肢体与未手术肢体的足灌注之比提供足血流恢复的度量。与对照小鼠相比，BMX-Notch4*小鼠的缺血肢体中的足血流更大，到第7天变得明显改进，并且在其余56天的测量时程中一直如此(图9)。尽管在手术后14天关闭Notch 4*的表达，但在Notch4*关闭后的整个测量过程中，血流的显著改进得以持续。

在一个单独实验中，通过使BMX-Notch4*小鼠和对照小鼠的一只肢体经历EFAO，在急性肢体缺血模型中研究了Notch激活的治疗作用。在EFAO过程之后，立即进行他莫昔芬施用以诱导BMX-Notch4*小鼠中Notch4*表达。在手术损伤之前和之后，通过(如本领域中已知的激光多普勒灌注成像或LDPI)测量手术和未手术肢体中的足灌注。手术与未手术肢体中的足灌注的比率提供足血流恢复的度量。如图10所示，到第21天，在表达Notch4*的小鼠中观察到EFAO后足灌注的显著改进。这些改进在第63天的整个测量期间得以持续。

这些结果表明，缺血性损伤后脑中Notch信号传导激活的预防和治疗作用也适用于其他缺血位点，并且结果证实，这种作用可以预防性、治疗性地起作用，并且是持久的，在Notch4激活停止后仍很好地持续。

示例性实施方案

在一个实施方案中，本发明的范围涵盖用于治疗血管疾病的Notch激活剂，其中所述血管疾病是缺血性疾病，其中所述缺血性疾病可以是心脏缺血、脑缺血、肢体缺血或颈动脉疾病。

在一个实施方案中，本发明的范围涵盖用于治疗血管疾病的Notch激活剂，其中所述血管疾病是脑的缺血性疾病，其中所述缺血性疾病可以是急性缺血性中风、短暂性缺血性发作、微梗塞、血管性痴呆或脑血管疾病。

在一个实施方案中，本发明的范围涵盖用于治疗血管疾病的Notch激活剂，其中所述血管疾病选自下组：涵盖血流减少的外周动脉疾病、肾功能不全或肾脏疾病；眼睛的血管疾病；脾脏血流减少；肠系膜动脉闭塞；肠梗塞；小血管疾病；以及由于动脉粥样硬化或糖尿病而引起的血管中血流减少。

在一个实施方案中，本发明的范围涵盖用于治疗血管疾病的Notch激活剂，其中Notch激活剂是Notch配体。在一个实施方案中，Notch配体选自下组：delta样配体1、delta样配体2、delta样3、delta样配体4、Jagged-1、Jagged-2和前述的Notch激活变体。

在一个实施方案中，本发明的范围涵盖用于治疗血管疾病的Notch激活剂，其中Notch激活剂是Notch胞内结构域。在一个实施方案中，Notch胞内结构域选自下组：Notch1、Notch 2、Notch 3和Notch 4胞内结构域和前述的Notch激活变体。

在一个实施方案中，本发明的范围涵盖用于治疗血管疾病的Notch激活剂，其中所述Notch激活剂选自下组：N-methylhemeanthidine chloride、丙戊酸、白藜芦醇、三乙酰基白藜芦醇、异硫氰酸苯乙基酯和Yhhu-3792。

在一个实施方案中，本发明的范围涵盖用于治疗血管疾病的Notch激活剂，其中所述血管疾病是缺血性疾病，其中所述缺血性疾病选自下组：心脏缺血、脑缺血、肢体缺血或颈动脉疾病，其中所述脑缺血病症选自下组：急性缺血性中风、短暂性脑缺血发作、微梗塞、血管性痴呆或脑血管疾病；其中Notch激活剂是Notch配体；其中Notch配体选自下组：delta样配体1、delta样配体2、delta样3、delta样配体4、Jagged-1、Jagged-2和前述的Notch激活变体。

在一个实施方案中，本发明的范围涵盖药物递送装置，所述药物递送装置用一种或多种Notch激活剂功能化或涂覆有当暴露于生理条件时洗脱一种或多种Notch激活剂的组合物；其中Notch激活剂选自下组：Notch配体、Notch胞内结构域、Notch的小分子激活剂和抗体，其中Notch配体选自下组：delta样配体1、delta样配体2、delta样3、delta样配体4、Jagged-1、Jagged-2和前述的Notch激活变体；其中所述装置可以是药物洗脱球囊或支架。

在一个实施方案中，本发明的范围涵盖用一种或多种Notch激活剂功能化的红细胞。在一个实施方案中，Notch激活剂是Notch配体。在一个实施方案中，Notch配体选自下组：delta样配体1、delta样配体2、delta样3、delta样配体4、Jagged-1、Jagged-2和前述的Notch激活变体。

在本说明书中引用的所有专利、专利申请和出版物都以相同的程度通过引用并入本文，就像每个独立的专利申请或出版物被具体地和单独地指出通过引用并入一样。出于说明而非限制的目的提供所公开的实施方案。尽管已经参考其所描述的实施方案描述了本发明，但是本领域技术人员将理解，可以在不脱离作为整体的本发明的精神和范围的情况下对本发明的结构和要素进行修改。