一种中药注射液的超高效液相指纹图谱检测方法

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，涉及一种中药注射液的超高效液相指纹图谱检测方法，具体为穿心莲内酯总磺化物注射液的超高效液相指纹图谱检测方法。

背景技术

喜炎平注射液的国家药品标准WS-10863(ZD-0863)-2002-2011Z中，规定指纹图谱的检测方法如下：

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Diamonsil C18色谱柱(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm)；以乙腈为流动相A，以磷酸二氢钾缓冲液(每1000ml水中加入磷酸二氢钾1.361g与庚烷-1-磺酸钠1.0g)为流动相B，按下表中规定进行梯度洗脱；柱温为25℃；检测波长为225nm。理论板数按17-氢-9-去氢穿心莲内酯-19-硫酸酯钠计算应不低于10000；17-氢-9-去氢穿心莲内酯-19-硫酸酯钠与17-氢-9-去氢穿心莲内酯-3-硫酸酯钠的分离度应不小于1.5。

参照物溶液的制备：取17-氢-9-去氢穿心莲内酯-3,19-二硫酸酯钠(FL-7)对照品、17-氢-9-去氢穿心莲内酯-19-硫酸酯钠(FL-3)对照品、17-氢-9-去氢穿心莲内酯(FL-6)对照品适量，精密称定，加50％乙腈制成每1ml含17-氢-9-去氢穿心莲内酯-3,19-二硫酸酯钠0.4mg、17-氢-9-去氢穿心莲内酯-19-硫酸酯钠对照品1mg、17-氢-9-去氢穿心莲内酯0.6mg的混合溶液；精密吸取以上混合溶液1.0ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备：精密量取本品5ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

检测法：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，检测，记录色谱图，即得。

供试品指纹图谱中应分别呈现与参照物色谱峰保留时间相同的色谱峰。按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.85。

采用上述检测方法处理样品溶液时遇到如下问题：

由于流动相含有缓冲液且含有离子对试剂，色谱柱损伤比较大造成色谱柱耐用性较差；每次检测时间长达70min。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明的目的是提供一种更简便、快速、色谱柱耐用的检测法，用于检测穿心莲内酯总磺化物注射液的指纹图谱。

本发明提供一种穿心莲内酯总磺化物注射液的超高效液相指纹图谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)供试品溶液制备：精密量取穿心莲内酯总磺化物注射液适量，置量瓶中，加入溶剂1稀释至刻度定容，混匀；

(2)参照物溶液制备：取17-氢-9-去氢穿心莲内酯-3,19-二硫酸酯钠(FL-7)对照品、17-氢-9-去氢穿心莲内酯-19-硫酸酯钠(FL-3)对照品和17-氢-9-去氢穿心莲内酯(FL-6)对照品各适量，置量瓶中，加溶剂2溶解并稀释至刻度定容，制成混合对照品溶液；精密吸取混合对照品溶液适量，置量瓶中，加水稀释至刻度定容，混匀；

(3)色谱条件：以C18或C8色谱柱；以乙腈为流动相A，5～20mM乙酸铵水溶液为流动相B，流速为0.3～0.5ml/min，采用梯度洗脱；检测波长为210～250nm；柱温为20～50℃；进样量：1～4μl；

(4)检测：量取参照物溶液与供试品溶液，分别注入液相色谱仪，记录0～37分钟色谱图；将色谱图导入国家药典委员会的中药色谱指纹图谱相似度评价系统，自动计算相似度。

作为优选，步骤(1)中，所述溶剂1为水。

作为优选，步骤(1)中，步骤为：精密量取穿心莲内酯总磺化物注射液适量，置量瓶中，加水定量稀释5～20倍(例如10倍)，混匀。

作为优选，步骤(2)中，所述溶剂2为乙醇，优选40％～60％(V/V)(如50％(V/V))乙醇。

作为优选，步骤(2)中，步骤为：取FL-7对照品、FL-3对照品和FL-6对照品适量，置量瓶中，加40％～60％(V/V)乙醇溶解并稀释至刻度定容，制成混合对照品溶液；精密吸取上述混合溶液适量，置量瓶中，加水定量稀释10～30倍(如20倍)，混匀。

作为优选，所述色谱柱为ACQUITY UPLC CSH C18柱，优选规格：2.1×100mm，1.7μm。

作为优选，所述柱温为20～40℃，优选20℃。

作为优选，所述流动相B为5～10mM(例如10mM)乙酸铵水溶液。

作为优选，所述流速为0.3～0.4ml/min，优选0.4ml/min。

作为优选，所述检测波长为220nm。

作为优选，所述进样量为1～3μl。

作为优选，所述梯度洗脱的洗脱程序如下所示：

本发明的关键点在于：1.采用超高效液相色谱法检测；2.检测时间比较短，提高检测效率；3.流动相不含有缓冲盐和离子对试剂，有利于延长柱子寿命提高方法耐用性。

本发明的有益技术效果：1.采用超高效液相色谱检测一种穿心莲内酯总磺化物注射液指纹图谱的方法，方法更简便、快速，色谱分离度良好，流动相不含有缓冲盐方法更耐用；2.本发明方法经验证后表明能准确检测穿心莲内酯总磺化物的指纹图谱，稳定性、重复性好，适用于检测穿心莲内酯总磺化物注射液。

附图说明

图1：超高效液相色谱法指纹图谱的对照图谱。

具体实施方式

下面结合具体实施例对权利要求书做进一步说明，但不构成对本发明的任何限制，任何对本发明做有限次修改所得到的技术方案仍然属于本发明所要保护的范围。

实施例1

1方法与结果

1.1供试品溶液制备：精密量取穿心莲内酯总磺化物注射液2ml，置20ml量瓶中，加水定量稀释10倍，混匀，即得。

1.2参照物溶液制备：取FL-7对照品、FL-3对照品和FL-6对照品适量，精密称定，加50％(V/V)乙醇制成每1ml含FL-7对照品0.6mg、FL-3对照品1.7mg和FL-6对照品1.0mg的混合对照品溶液；精密吸取上述混合对照品溶液1ml，置20ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

1.3色谱条件

ACQUITY UPLC CSH C18柱，2.1×100mm，1.7μm；以乙腈为流动相A，10mM乙酸铵水溶液为流动相B，流速为0.4ml/min，采用梯度洗脱；检测波长为220nm；柱温为30℃；进样量：2μl，洗脱程序为：

1.4.检测方法

精密吸取参照物溶液与供试品溶液定量，分别注入液相色谱仪，记录0～37分钟色谱图，见图1。

1.5结果评价

将测得的色谱图导入国家药典委员会发布的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012版本)相似度计算软件中，对图谱进行多点校正、匹配，由计算软件自动计算出相似度，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.95；非共有峰的峰面积之和应小于总峰面积的5.0％。

1.6仪器精密度考察

取同一份供试品溶液，连续进样5针，以对照图谱为参照，计算非公有峰面积及相似度，结果表明非共有峰面积占比在5％以内，相似度均在0.95以上。

1.7稳定性考察

取同一份供试品溶液，在0h、2h、4h、8h、12h进样，以对照图谱为参照计算非公有峰面积及相似度，结果表明非共有峰面积占比在5％以内，相似度均在0.95以上，供试品溶液在24h内稳定。

1.8重复性考察

取同一批供试品溶液，同法制备6份，分别检测指纹图谱，以对照图谱为参照，计算非公有峰面积及相似度，结果表明非共有峰面积占比在5％以内，相似度均在0.95以上。