一种使用高效液相色谱仪（HPLC）对四氯吡啶甲酸含量检测的方法

技术领域

本发明涉及制药废水领域，具体涉及一种使用高效液相色谱仪(HPLC)对四氯吡啶甲酸含量检测的方法，用于检测制药废水中四氯吡啶甲酸含量的测定。

背景技术

四氯吡啶甲酸是一种吡啶的衍生物，吡啶衍生物由于具有特殊的结构故可以合成特殊的药物，四氯吡啶甲酸就是合成农药的一种重要的原材料及中间体。在我国吡啶的衍生物年产量超过9.6万吨，每年消费量估计在4.3万吨左右，年需求量增长幅度约为13％以上。所以在吡啶衍生物的生产过程中会产生大量的废水，由于其结构稳定、具有一定的生物毒性，故难以生化降解，直接排放于自然水体中会对水生动植物造成巨大的影响。并且吡啶的衍生物具有精神毒性，能够麻痹中枢神经，对人眼及上呼吸道有刺激作用，高浓度吸入后会造成强烈的窒息感并出现幻视、幻听的症状，继而出现肌无力、抑郁、呕吐、意识丧失、大小便失禁、血压下降等症状。长期吸入会导致头晕、头痛、失眠、消化道功能紊乱及步态不稳等症状，还有可能伤害肝脏，引起皮炎等症状。如果误服可致死。

但是，目前使用高效液相色谱检测废水中四氯吡啶甲酸含量的方法仍是空白。

发明内容

为了解决现有技术存在的空白，本发明提供了一种检测废水中四氯吡啶甲酸含量的方法，具体地，本发明提供了一种使用高效液相色谱仪(HPLC)对四氯吡啶甲酸含量检测的方法。为实现本发明目的所采用的技术方案为：

一种高效液相色谱仪(HPLC)对四氯吡啶甲酸含量检测的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)配置四氯吡啶甲酸的标准待测液；

2)将步骤1)所得标准待测液依次进行高效液相色谱仪(HPLC)检测，得到标准待测液中的四氯吡啶甲酸吸收峰面积与绝对浓度之间的标准曲线；

3)将含有四氯吡啶甲酸的实际废水待测溶液离心，取上清液过滤膜作为待测样品；

4)将步骤3)所得的待测样品依次进行高效液相色谱仪(HPLC)检测，得到步骤3)所述待测样品中四氯吡啶甲酸的绝对含量。

作为本发明的一种优选技术方案，上述的一种高效液相色谱仪(HPLC)对四氯吡啶甲酸含量检测的方法，步骤1)中，所述的四氯吡啶甲酸标准待测液浓度梯度依次为0mg/L、1mg/L、3mg/L、5mg/L、8mg/L、10mg/L、15mg/L、20mg/L、25mg/L、30mg/L。

作为本发明的一种优选技术方案，上述的一种高效液相色谱仪(HPLC)对四氯吡啶甲酸含量检测的方法，步骤1)中，所制备的标准待测液所使用的溶剂为去离子水。

作为本发明的一种优选技术方案，上述的一种高效液相色谱仪(HPLC)对四氯吡啶甲酸含量检测的方法，步骤2)中，所使用的高效液相色谱仪装备有C18液相色谱柱，仪器型号最优选岛津LC-20。

作为本发明的一种优选技术方案，上述的一种高效液相色谱仪(HPLC)对四氯吡啶甲酸含量检测的方法，步骤2)中，所述的高效液相色谱仪(HPLC)流动相A为乙腈；流动相B为0.2％乙酸(即乙酸体积与乙酸和去离子水总体积比为0.2％)，其体积比例范围为(70-80:30-20)，其中最优比例为75:25；柱温箱温度范围在25-30℃，其中，最优温度为25℃；进样体积为50μL；检测时间为10min；检测波长为295nm；流速为0.5ml/min。

由于四氯吡啶甲酸是一种易溶于有机相的物质，本发明通过大量实验，为了保证其分离效果的情况下，优选得到乙腈的比例大于0.2％乙酸的技术方案。

作为本发明的一种优选技术方案，上述的一种高效液相色谱仪(HPLC)对四氯吡啶甲酸含量检测的方法，步骤3)中，所述的离心温度在25℃，转速为8000r/min。所述滤膜规格为0.22μm的水相滤膜。

作为本发明的一种优选技术方案，上述的一种高效液相色谱仪(HPLC)对四氯吡啶甲酸含量检测的方法，步骤4)中，所述的待测样品为实际废水四氯吡啶甲酸待测液；通过将废水中四氯吡啶甲酸的峰面积制与步骤2)中所得到的标准曲线拟合计算出步骤3)中实际废水四氯吡啶甲酸待测液中四氯吡啶甲酸的含量。

本发明相对于现有技术的有益效果包括：

本方法填补了对于四氯吡啶甲酸含量检测方法的空白，提供了一种高效、便捷、稳定的检测方法。

本方法出峰时间快，约在7.639min。本发明所检测出的主峰与杂质峰分离效果良好，该方法可靠；快速；能够准确的反应待测样品中四氯吡啶甲酸的含量，所制得的标线拟合度极高，R

附图说明

图1是本发明的系统适用性试验色谱图；

图2是本发明的标准曲线图；

图3是本发明的检测实际废水四氯吡啶甲酸色谱图。

图4是对比实施例色谱图

具体实施方式

下面将对本发明实施里中的技术方案进行清楚、完整的描述，以使本领域的技术人员能够更好的理解本发明的优点和特征，从而对本发明的保护范围做出更为清楚的界定。本发明所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

本发明的色谱条件如下：采用高效液相色谱法(HPLC)，以乙腈为流动相A，以0.2％乙酸溶液为流动相B，检测波长295nm；流速0.5ml/min；柱温箱稳定在25℃；进样体积为50μL；出峰时间在7.639min。

本发明的操作步骤如下：

1)配置四氯吡啶甲酸的标准待测液；

2)将步骤1)所得标准待测液依次进行高效液相色谱(HPLC)检测，得到标准待测液中的四氯吡啶甲酸的标准曲线；

3)将含有四氯吡啶甲酸的实际废水待测溶液离心，取上清液过膜作为待测样品；

4)将步骤3)所得的待测样品依次进行高效液相色谱(HPLC)检测，得到所述待测样品中四氯吡啶甲酸的含量。

如图1-图3所示，本发明所检测出的主峰与杂质峰分离效果良好，该方法可靠；快速；能够准确的反应待测样品中四氯吡啶甲酸的含量，所制得的标线拟合度极高，R

对比实施例1

采用高效液相色谱法(HPLC)，以乙腈为流动相A，以0.2％乙酸溶液为流动相B，流动相比例为A：B＝85:15，检测波长295nm；流速0.5ml/min；柱温箱稳定在25℃；进样体积为50μL。

对比实施例操作步骤如下：

1)配置四氯吡啶甲酸的标准待测液；

2)将步骤1)所得标准待测液依次进行高效液相色谱(HPLC)检测，得到对比实施例色谱图。

如图4所示，采用以乙腈为流动相A，以0.2％乙酸溶液为流动相B，流动相比例为A：B＝85:15主峰与杂质峰分离效果不明显。

本发明的方法填补了对于四氯吡啶甲酸含量检测使用液相色谱的空白，提供了一种可以稳定检测废水中四氯吡啶甲酸含量的方法。