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一种在间充质干细胞中稳定表达可分泌人胰岛素的方法

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本发明公开了一种在间充质干细胞中稳定表达可分泌人胰岛素的方法，包括如下步骤：(1)构建mCherry‑2A‑insulin‑His融合基因慢病毒表达载体，(2)将构建的mCherry‑2A‑insulin‑His融合基因慢病毒表达载体在人间充质干细胞中进行表达，即可得到分泌到胞外的人胰岛素。当转染细胞后，筛选获得稳定表达细胞系，细胞表达融合多肽并在自切割多肽2A的作用下，人胰岛素与mCherry红色荧光基因分离，人胰岛素可分泌至胞外。这一发明方法解决了当前在间充质干细胞中表达人胰岛素的困境，具有重大现实意义和潜在的医学应用价值。

著录项

公开/公告号CN113201062A

专利类型发明专利
公开/公告日2021-08-03

原文格式PDF
申请/专利权人武汉科技大学;
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申请/专利号CN202110434985.9
发明设计人邓文生;周翔宇;张程;
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申请日2021-04-22
分类号C07K14/62(20060101);C12N5/10(20060101);C12N15/86(20060101);
代理机构51241 成都方圆聿联专利代理事务所(普通合伙);
代理人罗军
地址 430081 湖北省武汉市青山区和平大道947号
入库时间 2023-06-19 12:05:39

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法律状态
2022-07-01

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发明专利权授予

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1. 一种在间充质干细胞中稳定表达可分泌人胰岛素的方法 [P] . 中国专利： CN113201062A . 2021-08-03
2. 人胰岛素基因在甲醇酵母中的分泌表达 [P] . 中国专利： CN1614019A . 2005-05-11
3. A process for isolating and purifying vasopeptidase-inhibiting peptides with specificity for the angiotensin-converting enzyme carboxylic site secreted by snake venom glands (bpps), particularly jararaca bothrops, or endogenously produced (evasins) having vasodilatory and anti- hypertensive; process of determining the starch sequence of inhibitor peptides secreted by the snake venom (bpps) or endogenous (evasin) venom; The process of determining the amino acid sequence of bpps by deducting the cdna from precursors of these molecules expressed in snake tissues, specifically bothrops jararaca. process of determining the amino acid sequence of evasins by deducing cdna from precursors of these molecules expressed in snake tissues, specifically bothrops jararaca, process of amplifying cdna from pancreatic and / or snake brain cdna libraries, specifically bothrops jararaca ; solid phase synthesis process of vasopeptidase inhibiting peptides with vasodilating and antihypertensive action, vaso [P] . BR0101088A . 2003-03-18

机译：一种分离和纯化具有对蛇毒腺（bpps），特别是贾拉卡双峰植物分泌的或具有血管扩张和抗高血压作用的内源性（evasins）分泌的血管紧张素转化酶羧基位点具有特异性的血管肽酶抑制肽的方法;确定蛇毒（bpps）或内源性（evasin）毒液分泌的抑制剂肽的淀粉序列的过程;通过从蛇组织中表达的这些分子的前体中减去cdna来确定bpps氨基酸序列的过程，尤其是杂种植物。通过从在蛇组织中表达的这些分子的前体推导cdna来确定evasins氨基酸序列的过程，特别是在蛇和蛇脑cdna文库中扩增cdna的过程，尤其是在蛇和草cdna文库中;血管肽酶抑制肽具有血管舒张和降压作用的固相合成方法
4. Method for improving nu00ecveis expression of one or more proteu00ecnas in a transgenic plant, and the expression of multiple proteu00ecnas in a transgenic plant.Use of a propeptu00ecdeo clivu00e1vel on secreting a connecter vegetable.And as a connecter clivu00e1vel in precusores of poliproteu00ecna synthesized through the secretory path in transgenic plants, use in a sequence of propeptu00ecdeo rich in amino acids and small,V, s and T and containing dipeptu00ecdicas sequences consisting of two resu00ecduos acids, two resu00ecduos basic or a resu00ecduo acid and a basic as a sequence binding clivu00e1vel, construction of DNA, vector,Transgenic plant, the use of a construction of DNA, and nucleic acid [P] . BR9913076A . 2001-05-08

机译：改善转基因植物中一种或多种蛋白表达的转基因表达以及转基因植物中表达多种蛋白表达的方法。使用前亲缘种在分泌连接植物上的用途。转基因植物中通过分泌途径合成的poliprote基因的先兆连接子，用于富含氨基酸，小，V，s和T的前肽序列，并含有由两个res氨基酸，两种残基的碱性或残基酸和一种碱性的作为序列结合的分子，DNA的构建，载体，转基因植物，DNA的构建和核酸的使用
5. "method for decreasing expression, production or secretion of an angiogenic factor or hypertrophic factor or both by mesenchymal stem cells, methods for decreasing an inhibitory effect, a deleterious effect, and a mesenchymal stem cell apoptosis effect, a method for increasing a mesenchymal stem cell stimulating effect, composition, and method for preparing cartilage in an individual diagnosed with diseased or damaged cartilage. " [P] . BR112013012697A2 . 2016-09-06

机译： “减少间充质干细胞表达，产生或分泌血管生成因子或肥大因子或两者的方法，减少抑制作用，有害作用和间充质干细胞凋亡效应的方法，增加间充质干细胞的方法被诊断出患病或受损的软骨的个体的刺激作用，组成和制备软骨的方法。”