一种聚乙二醇脂质及含有该脂质的脂质纳米粒含量的检测方法

技术领域

本发明涉及化学分析技术领域，特别涉及一种高效液相色谱串联质谱技术检测脂质纳米粒的方法。

背景技术

mRNA疫苗的核心原理是在mRNA中编码抗原遗传信息，然后递送至宿主细胞的细胞质中，在体内表达并诱导抗原特异性免疫应答。在开发mRNA疫苗时遇到的挑战之一是它们的稳定性差，原因在于mRNA自身的单链结构致使其极为不稳定，易被降解，自身携带负电荷，穿过表面同为负电荷的细胞膜递送亦是难题，所以需要特殊的修饰或包裹递送系统才能实现mRNA的胞内表达，改变mRNA胞内的生物分布、细胞靶向和摄取机制，促进mRNA的递送，发挥疫苗的效果。

LNP是目前核酸药物研究应用最多的递送系统之一，LNP能够安全而有效地递送核酸，相对于其他类型的核酸药物递送系统而言，LNP具有很多优势，比如核酸包封率高并且能够有效转染细胞，组织穿透性强，细胞毒性和免疫原性低，更有利于递送药物等优势，这些优势使LNP成为出色的核酸递送系统。目前的mRNA疫苗基本都在使用LNP技术。

mRNA疫苗中的LNP由四种主要成分组成：中性磷脂、胆固醇、聚乙二醇脂质和可电离脂质。其中，聚乙二醇脂质用于控制粒径并充当空间屏障起稳定作用，防止储存过程LNP微粒聚集。

M-DMG作为聚乙二醇脂质中的一种，在LNP递送系统中也尤为重要。然而现有技术中，尚没有针对上述聚合物适宜的检测方法。

M-DMG为极性较弱的大分化合物，在C18色谱柱上很难洗脱，一些与该化合物混合在一起的已知和未知杂质更是不易洗脱。因此，在以C18色谱柱为主要检测手段的反相色谱中，该物质不易被检出及分离；由于该物质并没有紫外吸收，故也无法采用选择性检测器紫外检测器进行检测。目前并无对于聚合物M-DMG的具体测定方法的报道，因此，建立聚合物M-DMG的具体测定方法对于在聚乙二醇脂质、脂质纳米颗粒、核酸药物组合物及其制剂的质量控制方面具有重要意义。

发明内容

为克服现有技术的不足，本发明旨在提供一种聚乙二醇脂质以及含有该脂质的脂质纳米粒含量的检测方法，其能有效分离产品与杂质，色谱峰形好，能够有效反应产品的纯度，该方法的分离度和重复性好、柱效高。

本发明第一方面提供一种聚乙二醇脂质含量的检测方法，所述的检测方法是通过高效液相色谱对聚乙二醇脂质进行检测，所述高效液相色谱的检测器为电喷雾检测器，又名带电气溶胶检测器(CAD)。

所述聚乙二醇脂质可以选自：2-[(聚乙二醇)-2000]-N,N-二十四烷基乙酰胺(ALC-0159)1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油甲氧基聚乙二醇(M-DMG)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-[氨基(聚乙二醇)](PEG-DSPE)、PEG-二甾醇基甘油(PEG-DSG)、PEG-二棕榈油基、PEG-二油基、PEG-二硬脂基、PEG-二酰基甘油酰胺(PEG-DAG)、PEG-二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(PEG-DPPE)和PEG-1,2-二肉豆蔻酰基氧基丙基-3-胺(PEG-c-DMA)中的一种。

优选地，所述聚乙二醇脂质的结构式为

更优选地，所述的L

在本发明的一个实施方式中，所述的聚乙二醇脂质为M-DMG，其结构式为

色谱条件为：

所述高效液相色谱采用反相色谱。

所述高效液相色谱的色谱柱的固定相为丁基硅烷键合硅胶。

所述固定相的粒度为2～15μm(如2μm、3μm、5μm、10μm、15μm)，优选地，所述固定相的粒度为3～10μm，更优选地，所述固定相的粒度为5μm。

所述固定相的孔径为

所述色谱柱的长度为100～300mm(如100mm、150mm、220mm、230mm、240mm、250mm、260mm、270mm、280mm、290mm、300mm)，优选地，所述色谱柱的长度为250mm。

所述色谱柱的直径为4～8mm(如4.6、7.8mm)，优选地，所述色谱柱的直径为4.6mm。

所述高效液相色谱的流动相包括流动相A和流动相B，流动相A为三氟乙酸水溶液，流动相B为乙腈或甲醇，流动相A+流动相B＝100％。

进一步地，所述流动相A为0.01～0.5％三氟乙酸水溶液，优选地，所述流动相A为0.1％三氟乙酸水溶液；所述流动相B为乙腈。

所述流动相A中三氟乙酸与水的体积比为0.1～1:100，优选地，所述流动相A中三氟乙酸与水的体积比为0.1～100。

所述流动相的流速为0.5～1.5mL/min(如0.8、0.9、1.0、1.1、1.2mL/min)，优选地，所述流动相的流速为1.0mL/min。

所述色谱柱的柱温为30～45℃(如30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃、41℃、42℃、43℃、45℃)，优选地，所述色谱柱的柱温为35～40℃。

在本发明的一个实施例中，所述色谱柱的柱温为35℃。

在本发明的一个实施例中，所述色谱柱的柱温为40℃。

所述高效液相色谱的进样量为5～15μL(如5、8、9、10、11、12、15μL)，优选地，所述高效液相色谱的进样量为8～12μL。

在本发明的一个实施方式中，所述高效液相色谱的进样量为10μL。

所述的高效液相色谱采用梯度洗脱程序，所述梯度洗脱程序如下：

洗脱时间为0分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：85～95％，流动相B：余量；

洗脱时间为0～2分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：由85～95％梯度变化为25～35％，流动相B：余量；

洗脱时间为2～18分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：由25～35％梯度变化为2～8％，流动相B：余量；

洗脱时间为18～22分钟时，保持等度洗脱，流动相的体积浓度：流动相A：2～8％，流动相B：余量；

洗脱时间为22～23分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：由2～8％梯度变化为85～95％，流动相B：余量；

洗脱时间为23～30分钟时，保持等度洗脱，流动相的体积浓度：流动相A：85～95％，流动相B：余量。

在本发明的一个实施方式中，所述梯度洗脱程序如下：

洗脱时间为0分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：90％，流动相B：余量；

洗脱时间为0～2分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：由90％梯度变化为30％，流动相B：余量；

洗脱时间为2～18分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：由30％梯度变化为5％，流动相B：余量；

洗脱时间为18～22分钟时，保持等度洗脱，流动相的体积浓度：流动相A：5％，流动相B：余量；

洗脱时间为22～23分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：由5％梯度变化为90％，流动相B：余量；

洗脱时间为23～30分钟时，保持等度洗脱，流动相的体积浓度：流动相A：90％，流动相B：余量。

进一步地，所述电喷雾检测器的参数为：

Temperature：30℃～55℃(例如30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、)；

Filter：0.1sec～10sec(例如0.1sec、0.2sec、0.5sec、1.0sec、2.0sec、3.6sec、5.0sec、10.0sec)；

Range：1pA～500pA(例如1pA、2pA、5pA、10pA、20pA、50pA、100pA、200pA、500pA)。

进一步地，所述高效液相色谱中的高效液相色谱仪可以为岛津LC-16高效液相色谱仪。

进一步地，所述的高效液相色谱仪的色谱柱可以为ChromeCore 300(C4，4.6×250mm；5μm)色谱柱。

进一步地，上述检测聚合物M-DMG含量的方法为外标法。

本发明第二方面提供了一种脂质纳米粒含量的检测方法，所述的脂质纳米粒中包含聚乙二醇脂质，所述的检测方法是通过高效液相色谱对聚乙二醇脂质进行检测，所述高效液相色谱的检测器为电喷雾检测器，又名带电气溶胶检测器(CAD)。

进一步地，所述的脂质纳米粒中还包含甾族脂质、阳离子脂质和中性脂质。

进一步地，所述的甾族脂质选自燕麦甾醇、β-谷甾醇、菜子甾醇、麦角骨化醇、菜油甾醇、胆甾烷醇、胆固醇、粪甾醇、脱氢胆固醇、链甾醇、二氢麦角骨化醇、二氢胆固醇、二氢麦角甾醇、黑海甾醇、表胆甾醇、麦角甾醇、岩藻甾醇、六氢光甾醇、羟基胆固醇；羊毛甾醇、光甾醇、海藻甾醇、谷甾烷醇、谷甾醇、豆甾烷醇、豆甾醇、胆酸、甘氨胆酸、牛磺胆酸、脱氧胆酸和石胆酸中的一种。

进一步地，所述的阳离子脂质选自(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵(DOTAP)、N-[1-(2,3-二油酰氯)丙基]-N,N,N-氯化三甲胺(DOTMA)、三氟乙酸二甲基-2,3-二油烯氧基丙基-2-(2-精胺甲酰氨基)乙基铵(DOSPA)、溴化三甲基十二烷基铵(DTAB)、溴化三甲基十四烷基铵(TTAB)、溴化三甲基十六烷基铵(CTAB)和溴化二甲基双十八烷基铵(DDAB)中的一种。

进一步地，所述的中性脂质选自1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)、1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DPPC)、1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DOPE)、1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DPPE)、1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DMPE)、2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸-(1'-rac-甘油)(DOPG)、油酰磷脂酰胆碱(POPC)和1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰乙醇胺(POPE)中的一种。

所述聚乙二醇脂质可以选自：2-[(聚乙二醇)-2000]-N,N-二十四烷基乙酰胺(ALC-0159)1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油甲氧基聚乙二醇(M-DMG)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-[氨基(聚乙二醇)](PEG-DSPE)、PEG-二甾醇基甘油(PEG-DSG)、PEG-二棕榈油基、PEG-二油基、PEG-二硬脂基、PEG-二酰基甘油酰胺(PEG-DAG)、PEG-二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(PEG-DPPE)和PEG-1,2-二肉豆蔻酰基氧基丙基-3-胺(PEG-c-DMA)中的一种。

优选地，所述聚乙二醇脂质的结构式为

更优选地，所述的L

在本发明的一个实施方式中，所述的聚乙二醇脂质为M-DMG，其结构式为

色谱条件为：

所述高效液相色谱采用反相色谱。

所述高效液相色谱的色谱柱的固定相为丁基硅烷键合硅胶。

所述固定相的粒度为2～15μm(如2μm、3μm、5μm、10μm、15μm)，优选地，所述固定相的粒度为3～10μm，更优选地，所述固定相的粒度为5μm。

所述固定相的孔径为

所述色谱柱的长度为100～300mm(如100mm、150mm、220mm、230mm、240mm、250mm、260mm、270mm、280mm、290mm、300mm)，优选地，所述色谱柱的长度为250mm。

所述色谱柱的直径为4～8mm(如4.6、7.8mm)，优选地，所述色谱柱的直径为4.6mm。

所述高效液相色谱的流动相包括流动相A和流动相B，流动相A为三氟乙酸水溶液，流动相B为乙腈或甲醇，流动相A+流动相B＝100％。

进一步地，所述流动相A为0.01～0.5％三氟乙酸水溶液，优选地，所述流动相A为0.1％三氟乙酸水溶液；所述流动相B为乙腈。

所述流动相A中三氟乙酸与水的体积比为0.1～1:100，优选地，所述流动相A中三氟乙酸与水的体积比为0.1～100。

所述流动相的流速为0.5～1.5mL/min(如0.8、0.9、1.0、1.1、1.2mL/min)，优选地，所述流动相的流速为1.0mL/min。

所述色谱柱的柱温为30～45℃(如30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃、41℃、42℃、43℃、45℃)，优选地，所述色谱柱的柱温为35～40℃。

在本发明的一个实施例中，所述色谱柱的柱温为35℃。

在本发明的一个实施例中，所述色谱柱的柱温为40℃。

所述高效液相色谱的进样量为5～15μL(如5、8、9、10、11、12、15μL)，优选地，所述高效液相色谱的进样量为8～12μL。

在本发明的一个实施方式中，所述高效液相色谱的进样量为10μL。

所述的高效液相色谱采用梯度洗脱程序，所述梯度洗脱程序如下：

洗脱时间为0分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：85～95％，流动相B：余量；

洗脱时间为0～2分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：由85～95％梯度变化为25～35％，流动相B：余量；

洗脱时间为2～18分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：由25～35％梯度变化为2～8％，流动相B：余量；

洗脱时间为18～22分钟时，保持等度洗脱，流动相的体积浓度：流动相A：2～8％，流动相B：余量；

洗脱时间为22～23分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：由2～8％梯度变化为85～95％，流动相B：余量；

洗脱时间为23～30分钟时，保持等度洗脱，流动相的体积浓度：流动相A：85～95％，流动相B：余量。

在本发明的一个实施方式中，所述梯度洗脱程序如下：

洗脱时间为0分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：90％，流动相B：余量；

洗脱时间为0～2分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：由90％梯度变化为30％，流动相B：余量；

洗脱时间为2～18分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：由30％梯度变化为5％，流动相B：余量；

洗脱时间为18～22分钟时，保持等度洗脱，流动相的体积浓度：流动相A：5％，流动相B：余量；

洗脱时间为22～23分钟时，流动相的体积浓度：流动相A：由5％梯度变化为90％，流动相B：余量；

洗脱时间为23～30分钟时，保持等度洗脱，流动相的体积浓度：流动相A：90％，流动相B：余量。

进一步地，所述电喷雾检测器的参数为：

Temperature：30℃～55℃(例如30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、)；

Filter：0.1sec～10sec(例如0.1sec、0.2sec、0.5sec、1.0sec、2.0sec、3.6sec、5.0sec、10.0sec)；

Range：1pA～500pA(例如1pA、2pA、5pA、10pA、20pA、50pA、100pA、200pA、500pA)。

进一步地，所述高效液相色谱中的高效液相色谱仪可以为岛津LC-16高效液相色谱仪。

进一步地，所述的高效液相色谱仪的色谱柱可以为ChromeCore 300(C4，4.6×250mm；5μm)色谱柱。

进一步地，上述检测脂质纳米粒含量的方法为外标法。

本发明第三方面提供了本发明第一方面或第二方面所述的检测方法在聚合物M-DMG质量评价中的应用。

本发明第四方面提供了本发明第一方面或第二方面所述的检测方法在聚乙二醇脂质质量评价中的应用，优选地，所述聚乙二醇脂质中包含聚合物M-DMG。

本发明第五方面提供了本发明第一方面或第二方面所述检测方法在脂质纳米粒质量评价中的应用，所述的脂质纳米粒中包含聚乙二醇脂质。

进一步地，所述的脂质纳米粒中还包含甾族脂质、阳离子脂质和中性脂质。

进一步地，所述的甾族脂质选自燕麦甾醇、β-谷甾醇、菜子甾醇、麦角骨化醇、菜油甾醇、胆甾烷醇、胆固醇、粪甾醇、脱氢胆固醇、链甾醇、二氢麦角骨化醇、二氢胆固醇、二氢麦角甾醇、黑海甾醇、表胆甾醇、麦角甾醇、岩藻甾醇、六氢光甾醇、羟基胆固醇；羊毛甾醇、光甾醇、海藻甾醇、谷甾烷醇、谷甾醇、豆甾烷醇、豆甾醇、胆酸、甘氨胆酸、牛磺胆酸、脱氧胆酸和石胆酸中的一种。

进一步地，所述的阳离子脂质选自(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵(DOTAP)、N-[1-(2,3-二油酰氯)丙基]-N,N,N-氯化三甲胺(DOTMA)、三氟乙酸二甲基-2,3-二油烯氧基丙基-2-(2-精胺甲酰氨基)乙基铵(DOSPA)、溴化三甲基十二烷基铵(DTAB)、溴化三甲基十四烷基铵(TTAB)、溴化三甲基十六烷基铵(CTAB)和溴化二甲基双十八烷基铵(DDAB)中的一种。

进一步地，所述的中性脂质选自1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)、1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DPPC)、1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺DOPE)、1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DPPE)、1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DMPE)、2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸-(1'-rac-甘油)(DOPG)、油酰磷脂酰胆碱(POPC)和1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰乙醇胺(POPE)中的一种。

本发明第六方面提供了本发明第一方面或第二方面所述检测方法在核酸药物组合物及其制剂的质量评价中的应用，所述的核酸药物组合物及其制剂中包含脂质纳米粒，所述脂质纳米粒中包含聚乙二醇脂质。

该检测方法能够快速便捷的分离聚乙二醇脂质样品及杂质，从而有效的控制聚乙二醇脂质的产品质量，且该方法在系统适用性、专属性、检测性、定量性、线性范围、回收率、重复性等方面完全符合标准且具有较高耐用性。

附图说明

图1为100％供试品溶液的液相色谱图。

图2为空白溶液的液相色谱图。

图3为杂质1的液相色谱图。

图4为杂质2的液相色谱图。

图5为杂质3的液相色谱图。

图6为杂质4的液相色谱图。

图7为杂质5的液相色谱图。

图8为对照品溶液1-6的线性关系图。

图9为对照品溶液G1-G5的线性关系图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明术语“阳离子脂质”是指能够带正电的脂质分子。

本发明术语“中性脂质”术语是指不带电荷的、非磷酸甘油酯的脂质分子。

本发明术语“聚乙二醇脂质”是指包含脂质部分和聚乙二醇部分的分子。

本发明术语“脂质纳米颗粒”是指具有至少一个纳米量级尺寸的颗粒，其包含至少一种脂质。

本发明术语“C

本申请实施例中所述的聚合物M-DMG-2000，其结构式为

依照本发明所述检测方法，其中0.1％三氟乙酸水溶液为量取1mL三氟乙酸加入到1000没L纯化水中配制成0.1％三氟乙酸水溶液。稀释剂：采用乙腈作为稀释剂。

实施例1

M-DMG-2000的HPLC检测：

仪器：岛津LC-16高效液相色谱仪检测器：Thermo Veo RS检测器色谱柱：丁基硅烷键合硅胶为填充剂(ChromeCore 300C4 4.6×250mm；5μm)

流动相A：采用0.1％三氟乙酸水溶液作为流动相A。

流动相B：采用乙腈作为流动相B

采用电喷雾检测器(CAD)检测Range：500pA；filter：10sec；Tem:35℃

按下表1进行梯度洗脱：

洗脱程序

表1

柱温：40℃

流速：1.0mL/min

进样量：10μL

工作站：LC-Solution

100％供试品溶液：精密称取M-DMG-2000待测品20mg置10mL量瓶中，加乙腈使溶解，定容摇匀，作为供试品溶液。

1％供试品溶液：精密量取上述100％供试品溶液1mL置100mL容量品中，加乙腈定容至刻度，摇匀，作为1％供试品溶液。

空白溶液：纯乙腈

精密量取上述100％供试品溶液、1％供试品溶液以及空白溶液各10μL注入液相色谱仪，记录30分钟色谱图，按照高低浓度法计算供试品纯度。

其中，100％供试品溶液的液相色谱图如图1及表2所示；空白溶液的液相色谱图如图2所示，说明空白溶液无干扰；杂质1-5的液相色谱图如图3-7所示，杂质1-5对应的峰表如表3-7所示，说明杂质对样品主峰无干扰。

表2

表3

表4

表5

表6

表7

实施例2

样品检测采用自身对照法计算纯度，高、低浓度均进行线性验证。

对照品储备液和对照品溶液的配制：

(1)对照品储备液1(约2mg/mL)

精密称定约20mgM-DMG-2000，置于10mL量瓶中，加入乙腈使溶解，定容至刻度，摇匀。

(2)对照品储备液2(约0.2mg/mL)

精密量取1mL对照品储备液1，置于10mL量瓶中，加入稀释剂定容至刻度，摇匀。

(3)对照品溶液1(约0.1mg/mL)

精密量取5mL对照品储备液2，置于10mL量瓶中，加入稀释剂定容至刻度，摇匀。

(4)对照品溶液2(约0.05mg/mL)

精密量取5mL对照品溶液1，置于10mL量瓶中，加入稀释剂定容至刻度，摇匀。

(5)对照品溶液3(约0.02mg/mL)

精密量取2mL对照品溶液1，置于10mL量瓶中，加入稀释剂定容至刻度，摇匀。

(6)对照品溶液4(约0.01mg/mL)

精密量取1mL对照品溶液1，置于10mL量瓶中，加入稀释剂定容至刻度，摇匀。

(7)对照品溶液5(约0.005mg/mL)

精密量取5mL对照品溶液4，置于10mL量瓶中，加入稀释剂定容至刻度，摇匀。

(8)对照品溶液6(LOQ)(约0.002mg/mL)

精密量取2mL对照品溶液4，置于10mL量瓶中，加入稀释剂定容至刻度，摇匀。

(9)对照品溶液G-1(约3mg/mL)

精密称定约15mgM-DMG-2000，置于5mL量瓶中，加入乙腈使溶解，定容至刻度，摇匀。

(10)对照品溶液G-2(约2.4mg/mL)

精密称定约12mgM-DMG-2000，置于5mL量瓶中，加入乙腈使溶解，定容至刻度，摇匀。

(11)对照品溶液G-3(约2mg/mL)

精密称定约20mgM-DMG-2000，置于10mL量瓶中，加入乙腈使溶解，定容至刻度，摇匀。

(12)对照品溶液G-4(约1.5mg/mL)

精密量取2.5mL对照品溶液G-1，置于5mL量瓶中，加入稀释剂定容至刻度，摇匀。

(13)对照品溶液G-5(约1.2mg/mL)

精密量取2.5mL对照品溶液G-2，置于5mL量瓶中，加入稀释剂定容至刻度，摇匀。

重复性溶液配制：

精密称定约20mgM-DMG-2000五份，分别置于10mL量瓶中，加入乙腈使溶解，定容至刻度，摇匀。

重复性实验结果如表8所示：

表8

结论：分别配置5份样品溶液，面积/浓度比的RSD为1.15％，说明该分析方法的重复性良好。

回收率样品配制：

按下表9分别称取样品，加乙腈溶解并定容。作为回收率溶液。

表9

回收率实验结果如表10所示：

表10

结论：分别配置80％、100％、120％浓度的样品，回收率在92.0％-104.5％之间，且RED小于10％，表明该方法的准确度良好。

对照品溶液1-6的线性结果如表11所示，根据表11的结果作图得到线性关系图如图8所示。

表11

结论：M-DMG-2000在0.002-0.1mg/mL范围内，响应呈线性，R

对照品溶液G1-G5的线性结果如表12所示，根据表12的结果作图得到线性关系图如图9所示。

表12

结论：M-DMG-2000在1-3mg/mL范围内，响应呈线性，R