新型阻塞型睡眠呼吸暂停综合征动物模型猪的建立方法

技术领域

本发明涉及动物模型构建技术领域，具体涉及一种新型阻塞型睡眠呼吸暂停综合征动物模型猪的建立方法。

背景技术

OSA（阻塞性睡眠呼吸暂停）的特点是周期性的上呼吸道阻塞引起睡眠时气流间歇停止或减少。流行病学研究表明中度至重度OSA影响33%至50%的成年人。

从病理生理角度来看，OSA的特征为睡眠高阻力性呼吸，导致呼吸暂停及呼吸不足，高阻力的形成归结为上气道解剖学狭窄和咽部肌肉功能异常。上气道解剖易感性是导致咽塌陷发生的关键因素之一，由此引起OSA的解剖因素包括上气道狭窄和肥胖。

OSA与肥胖密切相关，在过去的20年里，由于肥胖症的流行，OSA的患病率大幅上升，超过60%的OSA患者存在肥胖。

肥胖会导致睡眠时的咽部塌陷，肥胖OSA患者软腭脂肪沉积较多。中央型肥胖也可导致上呼吸道的解剖易感性OSA。腹部脂肪组织的积聚减少了肺体积。

目前常以低氧或直接在气管内造成阻塞建立OSA模型，绕过了造成人类OSAS最重要的部位-上气道。

迄今为止国内外尚缺乏理想的、接近于临床病理状态的动物模型，导致机制研究滞后，发病机制和病理生理尚不完全清楚。

因此，建立一个肥胖相关的自发性且存在上气道阻塞的OSA动物模型势在必行。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型阻塞型睡眠呼吸暂停综合征动物模型猪的建立方法。

本发明一种新型阻塞型睡眠呼吸暂停综合征动物模型猪的建立方法，包括如下步骤：通过喂养的方式将巴马猪饲养为体重指数＞40kg/㎡的肥胖实验猪，建立肥胖相关的自发性阻塞性睡眠呼吸暂停动物模型；上气道阻塞的建立：在肥胖实验动物猪声门上方注射生理盐水造成上气道狭窄的方法建立阻塞性睡眠呼吸暂停动物模型。

所述建立肥胖相关的自发性阻塞性睡眠呼吸暂停动物模型，应用巴马猪，早、中、晚三次给予全价饲料自由饮水，饲养温度18-26℃，湿度10%-80%。检测猪睡眠过程中睡眠呼吸暂停低通气指数（apnea hypopnea index, AHI）分别为≥5次/小时。

在完成阻塞性睡眠呼吸暂停动物模型后，使用电子支气管镜经猪鼻腔进镜，观察猪声门上及口腔各结构。使用TBNA穿刺针分别于软腭及两侧颚咽弓处注射生理盐水与碘普罗胺造影剂混合物7.5ml，电子支气管镜观察双侧颚咽弓隆起。

在实验动物猪颈部注射生理盐水后进行颈部CT扫描，提示有气道结构变化，上气道狭窄。

本发明建立了一种与阻塞型 SAHS 的自然病理状态比较相符，具有稳定、可靠、重复性好的疾病动物模型。

本发明具有如下有益效果：

本发明中，避免了一些模型中采用低氧方式诱导OSA模型，绕过了造成人类阻塞性OSAHS 最重要的部位, 即上气道。

本发明中，用安全有效的生理盐水充当充填物造成动物上气道的狭窄、所建立的动物模型与阻塞型 SAHS 的自然病理状态比较相符，具有稳定、可靠、重复性好的特点。

在本发明中，实验动物猪模型更加符合OSAHS 的自然病理状态。

在本发明中，主要的观察指标包括所建立的动物模型是否具有鼻鼾、呼吸暂停、睡眠紊乱等OSA的症状；咽部解剖结构是否出现咽壁软组织增厚、咽腔的径线是否改变。

在本发明中，实验结果显示实验动物在OSA造模过程中出现的症状和观察指标符合OSA临床和影像学特征。

在本发明中，联合肥胖及上气道阻塞两种方法进行造模，更加贴近动物和人体上气道OSA的病理生理改变，造模方法具有操作简单，可重复性高的特点，为今后OSA模型的进一步研究提供了一种新的安全有效、可行的方法。

具体实施方式

提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。

实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验

步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。

其中氯化钠注射液(100ml:0.9g) 袋装由中国大冢制药有限公司提供；盐酸塞拉嗪注射液(速眠新)由长沙拜特生物科技研究所有限公司提供；丙泊酚注射液(50ml：0.5g乐维静)由四川国瑞药业有限公司提供；咪达唑仑注射液(2ml:10mg 力月西)由江苏恩华药业股份有限公司提供；碘普罗胺造影剂300(优维显)由拜耳公司提供；电子支气管镜由安保（丹麦）股份有限公司Ambu A/S aScope3提供，型号为403001000； CT为联影CT960+；生命体征监护仪由GE Healthcare Finland Oy Kuortaneenkatu 2,Fi-00510 Helsinkin提供，Finland 型号为B20i。

实施例

本实施例提供了一种采用喂养的方法制作肥胖相关性OSAS动物模型，包括如下步骤：

巴马猪分早、中、晚三次给予全价饲料（天津名门动物食品有限公司提供），自由饮水，饲养温度18-26℃，湿度10%-80%。

观察巴马猪的外形，测量体重，计算体重指数。观察实验动物猪睡眠过程中呼吸暂停和低通气的次数。

体重指数的计算：BMI=体重(以千克为单位)除以身高的平方(以米为单位)。大于等于28为肥胖。

三个月后实验猪具有以下一个或多个特征：

（1）体型肥胖；

（2）颈部短粗，颈围大；

（3）体重指数增高；

（4）日间嗜睡；

（5）睡眠过程有鼾声；

（6）睡眠过程血氧饱和度下降；

（7）睡眠过程出现呼吸睡眠暂停现象。

进一步进行上气道阻塞动物模型的制作，包括如下步骤：

（1）诱导麻醉：实验动物猪饲养肥胖后进行该操作。手术当天早晨禁食、禁水，测定体重。给予速眠新和米达唑仑以1:1以0.5ml/kg进行肌肉注射诱导麻醉。成功麻醉后建立耳缘静脉通路，静脉间断推注丙泊酚用于术中维持麻醉。

(2)建立监护：麻醉后将动物呈仰卧位，固定四肢，予脉搏、血氧饱和度监护。

(3)电子支气管镜经猪鼻腔进镜，观察猪声门上及口腔各结构。

(4)上气道阻塞的诱导：使用TBNA穿刺针分别于软腭及两侧颚咽弓处注射生理盐水与碘普罗胺造影剂混合物7.5ml，气管镜观察双侧颚咽弓隆起满意。

(5)影像学检查：操作后对实验猪颈部进行电子计算机断层扫描。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。