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活细胞水平上改变基因启动子内特定顺式作用元件甲基化修饰水平的方法

摘要

本发明公开了活细胞水平上改变基因启动子内特定顺式作用元件甲基化修饰水平的方法。所述的方法包括以下步骤:(1)构建目的基因野生型启动子荧光素酶载体;(2)构建带有特定限制性内切酶位点的目的基因突变型启动子荧光素酶载体;(3)获得目的基因启动子区仅特定顺式作用元件高甲基化(>90%)的环形pGL3质粒。将所得环形质粒直接转染U251细胞,利用荧光素酶报告系统分析各顺式作用元件甲基化修饰改变对基因启动子活性的影响。通过特定序列甲基化再环形质粒法,实现了活细胞内目的基因启动子上特定顺式作用元件甲基化修饰水平的改变,以此方法可深入探讨同一启动子内不同顺式作用元件甲基化修饰水平变化对基因转录活性的影响。

著录项

  • 公开/公告号CN104561066B

    专利类型发明专利

  • 公开/公告日2018-01-16

    原文格式PDF

  • 申请/专利权人 徐州医科大学;

    申请/专利号CN201410723374.6

  • 发明设计人 张宝乐;高殿帅;刘捷;李亨;

    申请日2014-12-03

  • 分类号

  • 代理机构南京天华专利代理有限责任公司;

  • 代理人傅婷婷

  • 地址 221004 江苏省徐州市云龙区铜山路209号

  • 入库时间 2022-08-23 10:06:01

法律信息

  • 法律状态公告日

    法律状态信息

    法律状态

  • 2018-01-16

    授权

    授权

  • 2017-12-22

    专利申请权的转移 IPC(主分类):C12N15/63 登记生效日:20171201 变更前: 变更后: 申请日:20141203

    专利申请权、专利权的转移

  • 2015-05-27

    实质审查的生效 IPC(主分类):C12N15/63 申请日:20141203

    实质审查的生效

  • 2015-04-29

    公开

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