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一种检测HLA-A*31:01等位基因的MGB探针实时荧光PCR方法及其引物探针组合

摘要

本发明提出一种检测HLA‑A*31:01等位基因的MGB探针实时荧光PCR方法及其引物探针组合,在使用高特异性MGB探针检测法的基础上,同时结合ARMS(扩增阻滞突变系统)的方法,使检测HLA‑A*31:01等位基因的方法更具特异性。本发明设计的高特异性扩增HLA‑A*31:01等位基因的引物探针组合如下:上游引物Fp:5’‑GAGCCAGAGGATGGAGCC‑3’下游引物Rp:5’‑CCAGGTCCACTCGGTCtA‑3’探针probe1:5’‑FAM‑aGGCCtGAGTATTGGGAC‑MGB‑3’探针probe2:5’‑VIC‑CCTTCACaTTCCGTGTCTC‑MGB‑3’FAM为6‑carboxyfluorescein;VIC为4,7,2‑trichloro‑7‑phenyl‑6‑carboxyfluorescein;MGB为Minor Groove Binder;此外,使用内参基因ACTB的引物及探针,将目的基因的特异性引物、探针和内参基因的引物、探针加入同一管中进行多重荧光PCR反应,通过荧光扩增曲线分析结果。本发明具有简便、灵活快速、特异性高、高通量、无污染、灵敏度高、可实时监测反应等特点,可适用于人体外周血、唾液中全基因组DNA样本的HLA‑A*31:01等位基因的检测。

著录项

  • 公开/公告号CN106755530B

    专利类型发明专利

  • 公开/公告日2021-01-01

    原文格式PDF

  • 申请/专利权人 陕西佰美基因股份有限公司;

    申请/专利号CN201710102128.2

  • 申请日2017-02-24

  • 分类号C12Q1/6883(20180101);C12Q1/6858(20180101);C12N15/11(20060101);

  • 代理机构61211 西安智邦专利商标代理有限公司;

  • 代理人胡乐

  • 地址 712000 陕西省西安市西咸新区沣东新城协同创新港1号楼

  • 入库时间 2022-08-23 11:27:22

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