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利用内源性CRISPR系统对乳酸片球菌进行基因编辑的方法

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本发明公开了一种乳酸片球菌基因编辑质粒，其构建方法包括：将含有两个DNA重复序列和两个三型酶切位点Bbs1的mini‑CRISPR序列克隆至穿梭质粒pMG36E并转化至大肠杆菌中，获取转化子，再经活化、抽提得到乳酸片球菌基因编辑质粒pMG36E‑C。还公开了利用内源性CRISPR系统对乳酸片球菌进行基因敲除、插入及点突变的方法，不需要克隆外源CRISPR核酸酶基因，通过基因编辑质粒可高效快速的对乳酸片球菌进行基因组编辑，编辑效率可达90％，利于应用及推广；完成编辑的菌株只需2‑3次传代即可完成带抗性的敲除质粒消除，利于多个基因连续编辑，改变营养代谢途径或者插入新代谢途径，以达到定向改造。

著录项

公开/公告号CN110452922B

专利类型发明专利
公开/公告日2021-03-26

原文格式PDF
申请/专利权人华中农业大学;
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申请/专利号CN201910728089.6
发明设计人彭楠;刘玲;杨丹露;张志雨;梁运祥;
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申请日2019-08-08
分类号C12N15/74(20060101);C12N15/90(20060101);C12N15/10(20060101);
代理机构11901 北京盛询知识产权代理有限公司;
代理人陈巍
地址 430000 湖北省武汉市洪山区狮子山街1号
入库时间 2022-08-23 11:36:54

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