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基于Ngpiwi蛋白介导的牛源大肠杆菌基因敲除菌株及其构建方法

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摘要

本发明公开了一种基于Ngpiwi蛋白介导的牛源大肠杆菌基因敲除菌株及其构建方法；所述牛源大肠杆菌基因敲除菌株为在牛源大肠杆菌基因组上缺失潜在毒力相关基因的ORF序列或部分序列的缺失菌株。该方法首先成功构建带有Ngpiwi和待缺失靶基因序列左右同源臂的重组质粒；其次将重组质粒化学转化至牛源大肠杆菌中，在28℃传代诱导双交换重组，PCR筛选出缺失靶基因序列的菌株，之后在无抗生素培养基中37℃诱导质粒丢失，从而获得缺失潜在毒力基因相关序列的菌株。该遗传操作系统质粒较小，操作容易，应用广泛，不存在潜在的脱靶效应，敲除效率较高，无抗性基因筛选标记，为牛源大肠杆菌基因工程疫苗的研发提供了优良工具。

著录项

公开/公告号CN109593694B

专利类型发明专利
公开/公告日2022-04-22

原文格式PDF
申请/专利权人华中农业大学;
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申请/专利号CN201811318486.8
发明设计人张安定;付磊;韩丽;靳泽华;周红波;
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申请日2018-11-07
分类号C12N1/21;C12N15/70;C12R1/19;
代理机构武汉开元知识产权代理有限公司;
代理人王和平;冯超
地址 430070 湖北省武汉市洪山区狮子山街1号
入库时间 2022-08-23 13:31:52

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中文文献
外文文献

1. 基于Ngpiwi蛋白介导的牛源大肠杆菌基因敲除菌株及其构建方法 [P] . 中国专利： CN109593694A . 2019-04-09
2. 基于Ngpiwi蛋白介导的禽多杀性巴氏杆菌基因敲除菌株及其构建方法和应用 [P] . 中国专利： CN109266593B . 2021.08.24