野生型

摘要： 目的将Taq DNA聚合酶(Taq酶)不同的突变体与其野生型进行对比,分析二者扩增性能及聚合性能的差异,探讨突变型Taq酶在乙型、丙型肝炎病毒患者临床检测中的性能优势。方法提取DNA构建突变库,逐步筛选出热稳定性提高且扩增效率较高的突变体;选取威海市立医院2020年1月至2021年8月收治的乙型肝炎病毒表面抗原阳性样本30例、丙型肝炎HCV RNA阳性样本30例,通过PCR-荧光探针法应用Taq酶突变体与野生型进行性能检测。结果在同等PCR循环次数下,Taq酶突变体CT值均低于野生型,即突变体的扩增效率高于野生型;对临床样本进行3次重复检测,突变体标准曲线的相关系数为0.99;将Taq酶突变体进行重复检测,批内及批间的检测浓度对数值的变异系数(CV%)均小于5%。结论不同DNA聚合酶的突变体与野生型相比具有较高的扩增活性及扩增效率,灵敏度及特异性的优势也较为显著。这一特性为进一步研究开发扩增效率更高的DNA聚合酶,推动现代分子生物检测技术、辅助乙肝及丙肝病毒临床检测的发展打下基础。

摘要： 胃肠道间质瘤(Gastrointestinal Stromal Tumors, GIST)是胃肠道最常见的间叶源性肿瘤,其主要发病机制是c-kit与血小板源性生长因子受体PDGFRA基因突变。甲磺酸伊马替尼(Imatinib Mesylate, IM)可改善晚期GIST患者的生存期。然而部分患者因对IM耐药导致治疗失败。分子学研究表明约10%~15%的GIST无c-kit与PDGFRA基因突变,被称为野生型GIST。野生型GIST包括:NF1相关性、BRAF突变型、K-RAS突变型、四重野生型及其他基因突变型(PIK3CA突变) GIST与无综合征相关性、Carney三联征相关性、Carney-Stratakis综合征相关性GIST。同时表观遗传改变作为新的作用机制参与GIST的发生,对GIST的表观遗传的调控成为新的治疗方法。本文对国内外GIST分子学研究进行概述,旨在进一步阐明GIST的发病机制,为制定精准的个体化治疗方案提供帮助。

摘要： 目的探讨野生型胃肠道间质瘤(GIST)患者的临床病理特征,分析其预后影响因素。方法对郑州大学第一附属医院2013年10月至2020年12月收治的40例野生型GIST患者的临床病理资料进行回顾性分析,对比同时期临床病理资料完整的196例c-kit基因突变型GIST病例,对其临床病理特征进行分析。另对40例野生型GIST进行随访,分析其预后影响因素。结果在40例野生型GIST中男23例,女17例;中位发病年龄55.0岁,年龄范围30~82岁。肿瘤原发于胃者24例(60.0%),小肠15例(37.5%),另有1例(2.5%)患者肿瘤发生于其他部位。40例野生型GIST中,梭形细胞型17例,上皮样细胞型6例,混合型17例。肿瘤最大径范围0.5~15.0 cm。极低危险度、低危险度、中危险度、高危险度分别有5例(12.5%)、8例(20.0%)、13例(32.5%)、14例(35.0%)。CD117阳性率为97.5%(39/40),DOG1阳性率为100.0%(40/40),CD34阳性率为80.0%(32/40)。与经典的c-kit基因突变型GIST比较,野生型GIST肿瘤相对更小,危险度相对更低(P0.05)。结论野生型GIST作为独立的GIST亚型,临床病理特征不同于c-kit突变型GIST,生物学行为呈惰性。

摘要： 目的探讨卡瑞利珠单抗二线治疗晚期表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和中间变性淋巴瘤激酶(intermediate degenerative lymphoma kinase,ALK)野生型非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的临床疗效和安全性。方法选取2019年11月至2021年5月安庆116医院收治的53例晚期NSCLC患者作为研究对象,所有患者均采用卡瑞利珠单抗二线治疗。分析患者的基本临床特征、临床疗效、治疗期间不良反应。依据治疗时间,将研究对象分为≤2个月组(用药时长≤2个月,24例)和>2个月组(用药时长>2个月,29例),并对比2组患者的无进展生存率。结果53例晚期NSCLC患者的临床疗效客观缓解率、临床控制率分别为28.30%、79.25%。卡瑞利珠单抗二线治疗晚期EGFR和ALK野生型NSCLC,治疗期间不良反应多为Ⅰ~Ⅱ级,皮疹、胃肠道反应及肝功能损伤总发生率分别为7.55%、11.32%、3.77%。截至随访结束,>2个月组无进展生存率(48.28%)高于≤2个月组(20.83%),差异有统计学意义(P2个月组、≤2个月组患者的中位无进展生存时间分别为23.28个月、18.06个月。结论晚期EGFR和ALK野生型NSCLC患者采用卡瑞利珠单抗二线治疗临床疗效较好,不良反应可耐受,延长治疗时间有利于提高患者的无进展生存率。

摘要： 目的:探究结直肠癌患者的谷胱甘肽S-转移酶P-1(GSTP1)基因类型及其临床意义。方法:回顾性选取秦皇岛市第一医院确诊的结直肠癌并同意行基因检测的80例患者资料。根据GSTP1基因情况分为基因突变组(GSTP1基因突变)、基因野生型组(GSTP1基因野生型)。采集患者的血液标本及组织标本送至我院精准医疗科进行GSTP1表达检测,将患者检测结果与患者的临床及病理特征进行统计分析。患者均行化疗治疗,对比两组临床疗效、毒副作用、无进展生存期。选取18例组织标本分别检测结直肠癌和癌旁组织GSTP1基因表达情况。结果:80例患者经GSTP1基因检测显示突变型35例(基因突变组),野生型45例(基因野生型组);基因突变组与基因野生型组患者在年龄、性别构成比、吸烟、饮酒、肿瘤分型、组织学分型、浸润深度、神经侵犯、脉管癌栓、淋巴结转移等方面的差异均无统计学意义(P>0.05);基因突变组化疗总有效率(43.86%)明显低于基因野生型组(66.67%),差异有统计学意义(P0.05);随访患者无进展生存期基因突变组[(4.39±1.24)年]明显低于基因野生型组[(6.49±2.15)年],差异有统计学意义(P<0.05);结直肠癌组织GSTPl mRNA相对表达量显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:GSTP1基因在结直肠癌组织中阳性表达率高,GSTP1基因野生型患者化疗效果及预后好于基因突变患者。临床上应结合患者的GSTP1基因类型予以预后评估及治疗方案选择。

摘要： 在细胞水平上探讨Lupalbigenin(LG)抑制Ba/F3 EGFR WT肺癌细胞增殖的机制。使用电转染构建细胞系,利用MTS、Western blot、流式细胞术等方法构建稳定表达的EGFR(野生型)细胞Ba/F3 EGFR WT为材料,检测不同浓度化合物对细胞相关检测指标的影响。结果表明:以Ba/F3为模式细胞构建稳定表达EGFR的Ba/F3 EGFR WT肺癌细胞;在Ba/F3 EGFR WT细胞中,LG能够抑制Ba/F3 EGFR WT细胞增殖;下调EGFR信号通路中P-EGFR、P-Erk、P-Gsk-3β和P-S6蛋白水平;增加细胞总凋亡率;上调细胞中Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-6、Cleaved-Caspase-7、Bax、Cytochrome-C蛋白水平,下调Bcl-2蛋白水平;上调细胞中P27蛋白水平,下调CDK6、Cyclin A2、Cyclin D1蛋白水平。LG是一种天然小分子化合物,能够有效抑制野生型非小细胞肺癌细胞Ba/F3 EGFR WT增殖。有望为野生型EGFR肺癌提供药物开发的新思路,并为天然化合物在治疗人类疾病中提供理论基础。

摘要： 目的:探讨MRI在儿童弥漫内生型脑桥胶质瘤(DIPG)H3K27M突变型与野生型鉴别诊断中的价值.方法:回顾性分析经病理证实的54例突变型和9例野生型DIPG的临床资料和MRI影像学特征,分析比较两组病例的临床及影像学特征,对存在统计学差异的特征进一步采用受试者工作特征(ROC)曲线确定其最佳诊断点、灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值.结果:DIPG H3K27M突变型与野生型肿瘤在有无跨越小脑中脚、头尾长径(CCD)和最大横断面最小ADC(minADC)值上差异有统计学意义(P4.16 cm、最大横断面minADC值<0.717×10-3 s/mm2时,更倾向于诊断为H3K27M突变型.

摘要： 近些年,随着农业的不断发展和进步,各项生物技术的研发推动了转基因植物,朝商业化方向发展。并且,利用转基因植物的推广,实现了经济效益的提高。转基因技术在多种植物中,都取得了较为良好的研究效果,同时具有多方面的特性,成为当前的研究热点。本文就对于转基因青蒿与其野生型的生长和抗逆性进行比较,作出具体分析,以供参考。

摘要： 目的 探讨安罗替尼联合AN方案一线治疗晚期野生型肺腺癌患者的有效性和安全性.方法 收集肿瘤科诊治的ⅢB～Ⅳ期野生型[表皮生长因子受体(epidermal growth factorreceptor,EGFR)、间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)及ROS1基因均为野生型]的肺腺癌患者,观察组(接受安罗替尼+培美曲塞+奈达铂方案)患者22例,对照组(接受培美曲塞+奈达铂方案)患者26例.对两组患者进行疗效、不良反应观察.结果 近期客观疗效对比,观察组的客观缓解率(ORR)和疾病控制率(DCR)分别为50％和86.4％,优于对照组的ORR(30.8％)和DCR(61.5％),但组间比较均差异无统计学意义(P>0.05).观察组中位无进展生存时间(median progress-free survival,mPFS)较对照组延长1.54个月(9.38个月vs 7.84个月,P0.05).两组患者的治疗相关不良反应发生率对比,观察组在手足综合征、疲劳及高血压方面发生率高于对照组,且组间差异有统计学意义(P<0.05).结论 安罗替尼联合AN方案较AN方案一线治疗晚期野生型肺腺癌的近期疗效有获益趋势,可改善晚期野生型肺腺癌患者的一线治疗疾病控制时间,在总生存上尚未见获益.

摘要： 以野生型马齿苋和栽培型马齿苋为材料,分别对2种类型马齿苋的茎和叶的主要营养成分进行分析。结果显示,2种马齿苋都表现为叶营养成分高于茎。对于同一部位,野生马齿苋在矿物质、游离氨基酸、总脂肪酸、蛋白质等方面高于栽培型马齿苋。栽培型马齿苋在维C、果糖、葡萄糖、亚油酸(叶)含量上高于野生型。栽培型马齿苋的草酸含量低于野生型马齿苋,结果表明栽培型马齿苋更适于作为蔬菜食用。

摘要： 目的：构建PNPLA3基因野生型及I148M突变型慢病毒载体,同时用GV358空病毒构建Huh-7稳转株. 方法：利用限制性内切酶消化GV358慢病毒获得线性化载体、PCR技术扩增PNPLA3野生型及突变型基因片段,后将两者进行重组反应实现线性化载体和目的基因片段的体外环化.重组产物感染感受态细胞,挑取平板上的单克隆进行PCR鉴定,并对阳性克隆进行测序及结果分析,并对正确克隆进行质粒抽提.将质粒抽提产物与病毒包装辅助质粒共感染293T细胞,通过收集病毒上清液并进行超速离心法得到高滴度的慢病毒保存液,得到的慢病毒保存液感染293T细胞进行表达检测.不同感染条件下,应用GV358空病毒感染Huh-7细胞,以明确病毒感染Huh7细胞的最适条件,同时用不同浓度的嘌呤霉素处理Huh-7细胞,确定后期构建稳转株时的最适浓度,后期应用该浓度进行病毒稳转株的筛选. 结果：(1)单克隆测序分析证实基因测序结果与PNPLA3CDS区序列及突变位点序列一致.(2)慢病毒感染293T细胞发现细胞内出现明显的荧光,Western Blot检测发现55KD附近处有特征条带.(3)MOI=20,应用Enis时细胞内可观察到明显的荧光;嘌呤霉素筛选4天后,1.0ug/ml及更高浓度组细胞死亡;稳转株构建时,嘌呤霉素筛选3天后,无细胞死亡,且荧光显微镜下观察到细胞均表达荧光. 结论：(1)荧光及Western blot表达证实成功复制了PNPLA3基因及I148M突变型慢病毒模型;(2)荧光表达证实MOI值取20且应用Enis为慢病毒感染Huh-7细胞的适宜条件;(3)构建Huh-7过表达细胞系的最适嘌呤霉素浓度为1.0ug/ml.

摘要： 本发明涉及BLAD CD18野生型和突变型双基因型（A/G型）杂合子质粒及其构建方法，其是通过EcoRI酶切产生黏性末端后反向连接BLAD CD18突变基因型（G/G）片段和野生基因型片段（A/A）的连接产物，所述BLAD CD18突变基因型（G/G）片段和BLAD CD18野生基因型（A/A）片段的比例为1:1。构建方法主要是根据GenBank中BLAD CD18序列设计引物，进行PCR扩增后纯化产物。本发明提供的标准质粒，为建立起方便、高效且特异的检测BLAD的方法以及为测定奶牛群中BLAD发生频率和BLAD检测试剂盒的研发奠定了基础，使大规模BLAD致病基因的筛查成为可能，以此不仅可以掌握BLAD基因携带和发病情况，还可以排除隐性有害基因的携带者，避免和降低种公牛传播扩散有害基因的风险，最终为有效预防和治疗BLAD做出贡献。

摘要： 本发明提出了一种羊栖菜优良纯化型品系与野生型品系有性生殖人工杂交育种方法，其特征包括如下步骤：羊栖菜纯化型和野生型品系幼孢子体的隔离挂养直至生殖托发育成熟，得到的羊栖菜优良纯化型品系与野生型品系在室内杂交育种，羊栖菜优良纯化型品系和野生型品系杂交子代室内人工暂养，羊栖菜优良纯化型品系和野生型品系杂交子代自然海区养殖与日常管理，羊栖菜杂交子代与野生型优良生物学性状亲本回交，羊栖菜杂交品系与野生型亲本回交品系有性生殖自交繁育，本发明可为单位产量高、抗性强、性状遗传稳定和品质优良的羊栖菜新品系选育，提供一种褐藻杂交育种方法。

摘要： 本发明提供一种检测CPV2a、CPV2b与CPV2c并鉴别野生型与疫苗型的方法。本发明提供一种检测犬细小病毒2a(CPV2a)、犬细小病毒2b(CPV2b)与犬细小病毒2c(CPV2c)的结构性蛋白VP2的方法，其中可利用荧光侦测系统及侧流式免疫分析侦测信号。本发明另提供一种区分野生型与疫苗型的方法，该方法的第一种手段是利用荧光侦测系统及侧流式免疫分析进行SNP 36的分析，第二种手段则是进行SNP 899及SNP 963的分析。

摘要： 本发明涉及用于识别相对于其野生型具有提高的特定代谢物细胞内浓度的细胞的方法，其中通过重组工程实现细胞的修饰，以及用于制备相对于其野生型具有优化的特定代谢物产量的经基因修饰的生产细胞的方法，用于制备这些代谢物的方法，以及适合于此的核酸。根据本发明，编码重组酶的基因，其与已知的重组酶同源，经由载体转化到细胞中，并且将包含至少一个经修饰的基因G1-Gn或至少一个突变的DNA引入到该细胞中，并借助代谢物传感器识别具有最高代谢物产量的细胞。由这些细胞中分离出对升高的产量负责的突变，提取这些基因或突变并引入到生产菌株中，其由此表现出升高的代谢物产量。

摘要： 本发明公开了一种利用基因工程手段制备重组人松弛素野生型和突变体的方法，包括以下步骤：(1)设计并合成重组人松弛素野生型和突变体的酵母所喜爱的氨基酸密码子基因序列；(2)设计重组野生型和突变体人松弛素前体的氨基酸序列；(3)构建人松弛素野生型和突变体的分泌型重组酵母表达载体；(4)重组野生型和松弛素突变体的分泌表达；本发明公开了一种利用基因工程手段表达人松弛素野生型和突变体的方法。本发明通过巴斯德毕赤酵母表达系统，利用经过改造的分泌型表达载体pPICZ，对人松弛素突变体进行了高效表达；本发明公开的方法具有产量高，简便易行，费用低廉等优点。重组人松弛素野生型和突变体有扩血管作用，可用于心血管疾病，如高血压，心衰的治疗，伤口愈合和分娩时扩张子宫颈的治疗。

摘要： 本发明涉及BLAD CD18野生型和突变型双基因型（A/G型）杂合子质粒及其构建方法，其是通过EcoRI酶切产生黏性末端后反向连接BLAD CD18突变基因型（G/G）片段和野生基因型片段（A/A）的连接产物，所述BLAD CD18突变基因型（G/G）片段和BLAD CD18野生基因型（A/A）片段的比例为1:1。构建方法主要是根据GenBank中BLAD CD18序列设计引物，进行PCR扩增后纯化产物。本发明提供的标准质粒，为建立起方便、高效且特异的检测BLAD的方法以及为测定奶牛群中BLAD发生频率和BLAD检测试剂盒的研发奠定了基础，使大规模BLAD致病基因的筛查成为可能，以此不仅可以掌握BLAD基因携带和发病情况，还可以排除隐性有害基因的携带者，避免和降低种公牛传播扩散有害基因的风险，最终为有效预防和治疗BLAD做出贡献。

摘要： 本发明涉及斑蝥酸钠产品在制备治疗EGFR野生型或转移型非小细胞肺癌药物中的应用，所述斑蝥酸钠产品为斑蝥酸钠单体、斑蝥酸钠与维生素B6制成的产品，包括单一制剂、复方制剂和联合用药产品，所述产品可以为胶囊、片剂等口服剂型，也可以为注射液、冻干、脂肪乳、溶液等注射剂型。本发明斑蝥酸钠产品药品应用于EGFR野生型或转移型非小细胞肺癌，具有良好效果，为广大肿瘤患者提供了又一选择。

摘要： 本发明提出了一种羊栖菜优良纯化型品系与野生型品系有性生殖人工杂交育种方法，其特征包括如下步骤：羊栖菜纯化型和野生型品系幼孢子体的隔离挂养直至生殖托发育成熟，得到的羊栖菜优良纯化型品系与野生型品系在室内杂交育种，羊栖菜优良纯化型品系和野生型品系杂交子代室内人工暂养，羊栖菜优良纯化型品系和野生型品系杂交子代自然海区养殖与日常管理，羊栖菜杂交子代与野生型优良生物学性状亲本回交，羊栖菜杂交品系与野生型亲本回交品系有性生殖自交繁育，本发明可为单位产量高、抗性强、性状遗传稳定和品质优良的羊栖菜新品系选育，提供一种褐藻杂交育种方法。

摘要： 本发明提供一种检测CPV2a、CPV2b与CPV2c并鉴别野生型与疫苗型的方法。本发明提供一种检测犬细小病毒2a(CPV2a)、犬细小病毒2b(CPV2b)与犬细小病毒2c(CPV2c)的结构性蛋白VP2的方法，其中可利用荧光侦测系统及侧流式免疫分析侦测信号。本发明另提供一种区分野生型与疫苗型的方法，该方法的第一种手段是利用荧光侦测系统及侧流式免疫分析进行SNP 36的分析，第二种手段则是进行SNP 899及SNP 963的分析。

摘要： 本发明涉及生物工程技术领域的病毒检测方法，具体涉及一种检测野生型腺相关病毒的通用引物对/组合、检测方法及其应用。本发明提供一种可用于检测12种血清型的野生型腺相关病毒的通用引物对/组合，利用该引物组合，可实现12种血清型的野生型腺相关病毒的qPCR检测。相比传统的野生型腺相关病毒PCR检测方法，利用该引物组合的qPCR检测方法可有效提高检测灵敏度和准确性，更快捷、可定量。