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肿瘤抑素T7肽及其衍生物T7-NGR的载体构建及表达

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目的:为了提高作用靶向性，将导向肽NGR与肿瘤抑素T7肽的C端连接，获得T7肽及其衍生物T7-NGR的载体。方法:通过PCR和合成基因序列方法分别构建了肿瘤抑素T7肽及T7-NGR的克隆载体pMD-T7和pMD-T7N，经酶切和测序鉴定后，将两种载体分别双酶切，经低熔点琼脂糖凝胶电泳分离后，切下目的片段，与酶切回收的质粒载体pET28a在低熔点琼脂糖中直接进行连接反应。阳性克隆经酶切和测序鉴定，转化感受态E.coli BL21(DE3)，IPTG诱导表达。结果:酶切和测序鉴定结果正确，分别成功构建表达载体pET-T7和pET-T7N，经IPTG诱导，完成了表达条件的优化。Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳结果显示，当IPTG浓度为1mmol/L时，25℃诱导8h，分别获得了T7肽和T7-NGR的表达产物。结论:已经成功构建T7肽和T7-NGR的表达载体，获得了表达产物，该实验未见国内外报导，为下一步的小肽活性实验奠定了基础。

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来源
《第七届全国生化与生物技术药物学术年会》|2010年|35-41|共7页
会议地点绵阳
作者
贺欣; 赵启仁; 宋娜玲; 颜廷东;
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作者单位

中国药学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类影响生长代谢机能药物;
关键词
肿瘤抑素T7肽; T7-NGR; 导向肽; 基因克隆表达;

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