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首页> 中文会议>中国医师协会输血分会2010年第四届输血学术年会 >转染A549细胞总RNA的树突状细胞疫苗抗肿瘤效应的体外研究

转染A549细胞总RNA的树突状细胞疫苗抗肿瘤效应的体外研究

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目的：探讨人肺腺癌细胞株A549总RNA转染的人树突状细胞(DCs)在体外诱导特异性抗肿瘤免疫反应的能力。rn 方法：利用密度梯度离心法从血细胞分离机新鲜采集的外周富集血中分离出单个核细胞(PBMCs)，贴壁获得单核细胞，加入重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素-4(rhIL-4)进一步诱导为树突状细胞(DCs)，同时利用提取的A549细胞总RNA转染DCs来制备疫苗，并与T细胞混合培养诱导扩增细胞毒性T淋巴细胞(CTLs);实验分为转染A549细胞总RNA的DC组、未转染DC组和转染空脂质体DC组，分别以流式细胞术(FCM)鉴定DCs表型、酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-12、IFN-γ分泌水平、3H-TdR掺入检测T细胞增殖能力及乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定杀伤肿瘤活性并比较各组差异。rn 结果：⑴转染总RNA组DCs表面CD40、CD80、CD83、HLA-DR的表达较未转染组DCs和转染空脂质体组DCs均有升高，CD40在三组的表达率分别为：(69.01±7.67)％、(19.28±3.51)％和(39.62±2.72)％;CD80在三组的表达率分别为：(74.39±6.46)％、(15.48±3.03)％和(25.70±2.92)％;CD83在三组的表达率分别为：(81.79±4.61)％、(13.29±2.34)％和(31.42±1.97)％;HLA-DR在三组的表达率分别为：(76.53±5.13)％、(49.23±4.05)％和(29.94±3.53)％，差异有统计学意义(P＜0.05);⑵转染总RNA组DCs的IL-12和IFN-γ分泌水平较未转染组及转染空脂质体组明显升高(P＜0.05)，三组IL-12分别为：(543.24±68.33)pg/ml、(77.11+27.65)pg/ml和(167.78±31.84)pg/ml;三组IFN-γ分别为：(122.95±32.84)pg/ml、(41.06±10.97)pg/ml和(56.08±15.96)pg/ml;3)3H-TdR掺入试验所得的cpm，转染A549总RNA的DC组：7 437±720，未转染DC组：2 207±296，转染空脂质体的DC组：2 443±314，阳性对照组为：16739+91，差异有统计学意义(P＜0.05);4)LDH释放法可见转染A549总RNA的DC组的特异性杀瘤活性(58.55±8.27)％，明显高于未转染组(36.03±4.03)％和转染空脂质体组(33.47±8.21)％，差异具有统计学意义(P＜0.05)。rn 结论：人肺腺癌细胞A549总RNA转染的DC疫苗体外诱导的特异性抗肿瘤免疫能力显著增强，有望为肺腺癌的治疗提供新的手段。

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