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基于基因组高通量测序研究慢性鼻-鼻窦炎的1ncRNA表达谱

摘要

目的:长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是长度大于200bp的一类非编码RNA,此领域研究刚起步,lncRNA分类和功能尚不明确.目前认为lncRNA可能在染色体修饰,基因的转录以及转录后环节发挥重要的调控功能.在慢性鼻-鼻窦炎中,lncRNA的作用尚无人研究,不清楚lncRNA是否在慢性鼻-鼻窦炎的发病机制中发挥调控作用.因此将对此领域开展研究.rn 方法:纳入性别、年龄匹配的9例患者,其中3例嗜酸性粒细胞浸润为主的慢性鼻一鼻窦炎伴鼻息肉患者(ECRSwNP),3例非嗜酸性粒细胞浸润为主的慢性鼻一鼻窦炎伴鼻息肉患者(NECRSwNP),3例无慢性鼻一鼻窦炎的无功能垂体腺瘤患者(Control)作为对照。分别取鼻息肉组织尖端部分和蝶窦正常粘膜,提取总RNA并构建文库,进行转录组高通量测序(RNA-seq).RNA-seq产出的数据通过生物信息学分析,得到3组间差异表达的mRNA和lncRNA。对lncRNA进行靶基因预测,并对差异表达mRNA和lncRNA的靶基因进行G0, KEGG富集分析,分析其功能及互相作用网络。最后,随机挑选出8个差异表达的1cnRNA,通过每组选取30例患者进行qPCR验证,验证RNA-seq的数据准确性。rn 结果:通过RNA-seq发现了1301个lncRNA loci, 1564个lncRNA个转录本,其中目前GENCODE v19重己知的lncRNA转录本280个,新发现的lncRNA转录本1284个。经过qPCR验证实验,差异基因的表达变化趋势与RNA-seq一致,验证了RNA-seq的数据准确性。在ECRSwNP与Control间有2041个差异表达的基因,其中lncRNA 132个;在NECRSwNP与control间有1238个差异表达的基因,其中lncRNA 88个。lncRNA与mRNA相比长度更短,外显子数目更少,表达丰度更低,保守性更低。GO分析和KEGG富集分析,ECRSwNP与Control间差异表达的基因功能主要富集在免疫反应、细胞勤附、微管蛋白相关移动、钙离子结合、细胞因子及受体作用、趋化因子及受体作用、基质金属蛋白酶作用等方面,NECRSwN与Control间差异表达的基因功能主要富集在免疫反应、钙离子结合、细胞因子及受体作用、趋化因子及受体作用等方面;两组差异基因间的共同部分主要富集在细胞因子活动、趋化因子活动及钙离子结合等功能方面。rn 结论:首次研究了慢性鼻窦炎伴鼻息肉中lncRNA的表达模式,通过RNA-seq发现了差异表达的lncRNA并预测了其功能及靶基因。lncRNA有可能在慢性鼻-鼻窦炎伴有鼻息肉的病人发病过程中发挥了重要的作用,并可能成为诊断分型的生物标志物和治疗的新靶点。

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