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短乳杆菌Lactobacillus brevis CGMCC NO.1306谷氨酸脱羧酶基因的克隆与表达

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对本实验室筛选的γ-氨基丁酸(GABA)高产菌株——短乳杆菌Lactobacillus brevis CGMCC NO.1306的谷氨酸脱羧酶基因(gad)进行了克隆和表达。经过对引物和PCR 扩增条件的选择和优化,从提取的Lactobacillus brevis CGMCC NO.1306基因组中克隆得到了长度为1400bp的核酸片段。以pET-28a(+)为载体,对扩增片段和pET-28a(+)进行了Bamh和EcoR Ⅰ双酶切及连接,经过优化酶切和连接条件,得到了pET-28a(+)-gad表达质粒。连接产物转化BL21(λDE3),经双酶切分析、PCR克隆和DNA测序,从卡那霉素抗性平板上的阳性转化子中得到了表达谷氨酸脱羧酶的基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET28-gad,所得谷氨酸脱羧酶基因与Lactobacillus brevis ATCC 367的gad有95%的同源性,且具有GAD的保守序列。

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来源
《第五届全国化工年会》|2008年|1-7|共7页
会议地点西安
作者
范恩宇; 黄俊; 胡升; 梅乐和;
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作者单位

中国化工学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类酶的应用;
关键词
短乳杆菌; 谷氨酸脱羧酶; γ-氨基丁酸; 基因克隆; 微生物发酵法;

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