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缺氧诱导大鼠肺泡上皮细胞凋亡与缺氧诱导因子-1 α相关基因表达的关系

摘要

目的探讨缺氧诱导因子-1 α(Hypoxia inducible factor-1 α,HIF-1 α)及相关基因在缺氧诱导细胞凋亡中的作用以及缺氧对肺泡上皮细胞凋亡的影响。方法体外培养肺泡上皮细胞加入氯化钴(Cobalt chloride,COCl2)制作细胞缺氧模型,将小分子干扰缺氧诱导因子-1 α(HIF-1 α SmalJ interference RNA,HIF-1 α siRNA)有效的转染至细胞内,实验分为8组:常氧组,缺氧4、24、48小时组,HIF-1 α siRNA转染后常氧组,缺氧4、24、48小时组。采用荧光定量RT-PCR技术及WestBlot方法检测HIF-1 α、Bnip3、Nix mRNA表达及其蛋白含量情况,同时利用Hoechs33342染色法来观察肺泡上皮细胞凋亡的形态学变化,并比较各组细胞凋亡率变化。结果缺氧4小时开始出现肺泡上皮细胞凋亡,缺氧后的细胞凋亡率明显高于常氧组(P<0.01),随缺氧时间增加凋亡增加(P<0.05),小分子干扰后细胞凋亡率明显较未转染组降低(P<0.01),同时缺氧还可以诱导HIF-1 α蛋白的表达,随缺氧时间增加而上升(P<0.05),小分子干扰后HIF-1 α mRNA、蛋白较未转染组降低(P<0.05),两者间存在正相关,而Bnip3、Nix mRNA及:Bnip3蛋白表达并没有受缺氧及小分子干扰的影响变化(P>0.05)。结论缺氧可以诱导肺泡上皮细胞凋亡的发生,HIF-1 α参与了缺氧诱导细胞凋亡基因表达的调控过程,HIF-1 α siRNA可以干预缺氧引起肺泡上皮细胞凋亡的发生。

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