首页> 中文会议>第八次全国生物制品学术会议 >单管一步产物增强性逆转录反应的建立及其对疫苗生产用细胞基质逆转录酶活性的检测

单管一步产物增强性逆转录反应的建立及其对疫苗生产用细胞基质逆转录酶活性的检测

页面导航

摘要
著录项
相似文献
相关主题

摘要

出于安全需要,人用生物制品不能有造成潜在健康危险因素的存在.世界卫生组织最新标准提出,疫苗生产用的任何传代细胞都必须没有外源性病毒,尤其是逆转录病毒的污染.最近,一种超敏感的逆转录酶反应,我们称之为产物增强性逆转录酶反应(PERT)或建立在PCR基础上的逆转录反应(PBRT),可用来检测到单个逆转录病毒粒子中的微量逆转录酶活性,此反应的敏感性是常规逆转录酶检测方法的106倍.我们在国外文献报道的基础上建立了一种单管一步PERT(STOS-PERT)法,Ampliwax的应用可以把逆转录和PCR反应在同一个微量离心管中分隔开,反应的效率和重复性更高,而反应的的敏感性却不受影响.此外,在逆转录步骤中加入肝素可以完全抑制PERT反应中由于细胞凋亡所释放的细胞聚合酶(如DNA聚合酶α、γ等)引起的假阳性结果.我们应用调整后的STOS-PERT法分析了多种细胞品系,结果显示,大多数哺乳动物细胞(MRC-5,Vero,WISH,2BS,RK-13,MDCK等)的细胞上清液为PERT阴性,而细胞裂解液所呈现的PERT弱阳性,则是由于细胞中DNA聚合酶所引起的缘故,但这种假阳性结果可被肝素抑制.而鸡起源细胞,无论是来自鸡胚纤维原还是来自SPF级鸡胚的尿囊液,杂交瘤细胞SP2/0等都含有确定的逆转录酶活性,且不能被肝素所抑制.总之,本文所描述的改进后的STOS-PERT方法具有高度敏感性和特异性,可方便的区分细胞中真实的逆转录酶活性和真核细胞DNA聚合酶引起的RTase-1ike活性,操作简便、快速,可用于疫苗生产用细胞基质中微量逆转录病毒污染的筛查.

著录项

来源
《第八次全国生物制品学术会议》|2005年|9-15|共7页
会议地点昆明
作者
范小勇; 吕国贞; 吴丽娜; 陈静华; 张秀娟; 徐闻青; 郭盛淇;
展开▼
作者单位

中国微生物学会;

中华预防医学会;

展开▼
会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类免疫血清学;
关键词
产物增强性逆转录酶反应; 逆转录病毒; 生物制品; 细胞基质; 肝素; 细胞DNA聚合酶; 疫苗;

相似文献

中文文献
外文文献
专利

1. 荧光产物增强逆转录酶活性检测方法的建立及应用 [J] . 岳乔红 ,苏明权 ,杨柳 . 现代检验医学杂志 . 2005,第006期
2. 逆转录-半套式-聚合酶链反应单管法检测血清中HCV RNA [J] . 贺波 ,周晶 ,李莎 . 检验医学 . 2002,第002期
3. 鼻咽癌细胞中MDM2mRNA表达的逆转录多聚酶链反应半定量检测方法的建立 [J] . 罗均利 ,肖健云 ,田勇泉 . 中国耳鼻咽喉颅底外科杂志 . 1998,第001期
4. 反义RNA重组逆转录病毒逆转录套式PCR检测方法的建立 [J] . 曹素芳 ,孟庆文 ,于康震 . 中国兽医科技 . 2005,第8期
5. 不同肿瘤细胞株人端粒酶逆转录酶及端粒酶活性的检测及其意义 [J] . 于晓霞 ,石英爱 ,董贺 . 吉林大学学报（医学版） . 2008,第004期
6. 荧光产物增强逆转录酶活性检测方法的建立及应用 [C] . 岳乔红 ,苏明权 ,杨柳 . 中国检验医学中青年论坛 . 2005
7. 产物增强性逆转录检测法（PERT）检测逆转录病毒的研究 [A] . 曾文 . 2006

单管一步产物增强性逆转录反应的建立及其对疫苗生产用细胞基质逆转录酶活性的检测

摘要

著录项

相似文献

相关主题

期刊订阅