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问号钩端螺旋体lipL32/1-lipL41/1融合基因原核表达系统的构建及野生株lipL32、lipL41基因表达和病人血清特异抗体的检测

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目的：构建问号钩端螺旋体(简称钩体)lipL32/1-lipL41/1融合基因及其原核表达系统，鉴定表达产物的免疫原性，了解钩体野生株lipL32和lipL41基因携带和表达情况及钩体病人血清抗体水平。rn 方法：采用连接引物PCR构建lipL32/1-lipL41/1融合基因，常规方法构建其原核表达系统。rn 采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rLipL32/1-rLipL41/1表达情况。采用Western blot鉴定rLipL32/1-rLipL41/1的免疫原性。采用PCR和MAT分别检测97株问号钩体野生株lipL32和lipL41基因及其表达情况。采用ELISA检测228例钩体病人血清lipL32和lipL41基因产物的抗体。rn 结果：与报道的相关序列比较，lipL32/1-lipL41/1融合基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.9％和99.8％。目的重组蛋白rLipL32/1-rLipL41/1表达产量约为细菌总蛋白的10％，主要以包涵体形式存在。rn rLipL32/1和rLipL41/1兔抗血清均能与rLipL32/1-rLipL41/1结合。97.9％(95/97)和87.6％(85/97)问号钩体野生株分别有lipL32和lipL41基因。95.9％(93/97)和84.5％(82/97)问号钩体野生株分别与rLipL32s和rLipL41s兔抗血清出现效价范围为1:4～1:128的MAT阳性结果。分别有94.7％～97.4％和78.5％～84.6％病人血清rLipL32s和rLipL41s抗体阳性。rn 结论：本研究成功地构建了lipL32/1-lipL41/1融合基因及其原核表达系统，所表达的产物具有良好的免疫原性。lipL32和lipL41是广泛存在于不同血清群问号钩体并有较高表达率的基因，且其不同基因型的表达产物有广泛的抗原和抗体交叉。rLipL32/1-rLipL41/1具有成为钩体属特异性基因工程疫苗抗原的良好前景。

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来源
《首届长三角科技论坛：长三角生物医药发展论坛》|2004年|187-193|共7页
会议地点杭州
作者
罗冬娇; 严杰; 毛亚飞; 李淑萍; 罗依惠; 李立伟;
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作者单位

中国药学会;

中国生物工程学会;

浙江省药学会;

上海市药学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类免疫血清学;
关键词
问号钩端螺旋体; 融合基因; 基因表达; 免疫原性; 原核表达; 基因工程疫苗;

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