黄连素和姜黄素体外抑制肝癌细胞系生长的实验研究

摘要

目的:探讨黄连素和姜黄素联合低浓度长春新碱的肝癌细胞的毒性效应,重点探讨该组合对肝癌细胞的生长抑制、凋亡诱导及可能机制,为姜黄素联合化疗药物治疗肿瘤提供一定的依据.方法:实验分组设置为对照组、长春新碱组、姜黄素组及联合用药组.为探讨联合处理对肿瘤细胞的选择杀伤作用,实验采用细胞计数法测定细胞增殖情况(HepG2为肝癌细胞L02为正常肝细胞对照),比较各种处理条件对两种细胞的不同效应;结合克隆形成实验检测长期毒性效应,综合评价联合作用对HepG2细胞的增殖抑制;为进一步探讨所致细胞毒作用机制,利用DAPI染色、TUNEL染色测定死亡方式;线粒体膜电位测定检测线粒体损伤情况;流式细胞术检测各处理组细胞周期分布情况及凋亡情况;RT-PCR检测相关周期蛋白基因P21,肿瘤耐药性基因MDR1和LRP的变化情况。结果:与对照组相比较,姜黄素联合长春新碱组经24 h处理后,明显抑制HepG2细胞增殖能力(P<0.05 ),呈剂量依耐性;联合作用在长春新碱为1μg/ml时呈现对肿瘤细胞的特殊杀伤效果(P<0.05),对正常肝细胞无此效应(P>0.05);克隆形成实验显示联合作用明显抑制细胞集落形成能力,与细胞增殖实验结果一致;DAPI染色和TLtNEL实验显示联合用药组凋亡细胞明显增加(P<0.01);线粒体膜电位测定显示膜电位减低可能凋亡率增加相关;流式细胞术检测发现联合组G2/M期阻滞显著增加(P<0.05),sub-G 1期细胞也显著升高(P<0.05),与凋亡染色结果一致;RT-PCR检测到LRP,MDRl的表达降低以及P21的表达升高((P<0.05);结论:姜黄素联合低浓度长春新碱显著抑制HepG2生长,主要是通过细胞凋亡和周期阴滞的诱导实现,并且与肿瘤耐药性基因表达相关。本研究为姜黄素联合长春新碱为化疗肝癌的新方案提供一定理论依据。

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