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首页> 中文会议>2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会 >鸭源大肠杆菌AmpC酶基因分子特点、毒力基因检测及外膜蛋白分析

鸭源大肠杆菌AmpC酶基因分子特点、毒力基因检测及外膜蛋白分析

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摘要

目的：本文旨在对53株临床鸭源大肠杆菌质粒介导的AmpC酶基因分子特点、毒力基因及外膜蛋白进行分析.方法：通过头孢西丁纸片法和三维试验筛选高产AmpC酶的菌株,并对AmpC酶阳性菌株进行AmpC酶基因PCR检测,通过质粒接合和基因克隆试验分析AmpC酶基因是否可通过质粒接合进行传播及AmpC酶基因的基因环境.通过种系发育分型和ERIC-PCR分析,研究不同地区菌株之间的克隆亲缘关系.用PCR扩增菌株的毒力基因,分析毒力基因与多重耐药表型及种系发育分型的关系.此外,使用SDSPAGE技术对菌株进行外膜蛋白条带分析,并采用PCR技术扩增常见外膜蛋白基因(OmpA、OmpC、OmpF),分析外膜蛋白缺失与菌株多重耐药的关系.结果：结果显示,53株试验菌中,3株检测出AmpC酶基因(DHA-1和CMY-2基因型).提取的接合子质粒通过酶切、连接转化、测序分析,得到一个长度为14583bp的插入片段,该片段同时携带DHA-1基因和qnrB4基因,此序列上还含有插入序列ISCR1的部分序列,转运蛋白(SapC、SapB、SapA),诱导蛋白cinA,噬菌体休克蛋白(pspF、pspA、pspB、pspC、pspD),AmpC酶的转录调控因子ampR基因.结论：由此可得出DHA-1和qnrB4基因位于同一个可接合质粒上,这两种耐药基因可共同转移,共同传播.种系发育进化分型表明:11株大肠杆菌的4株为A类(占36.4％),B1类7株(占63.6％),没有发现高毒力的B2类和D类菌株.毒力基因检测结果表明:毒力岛(HPI)中的铁离子调节种系基因irp2、P型菌毛结构基因papA、血清耐受基因iss、cvaC、粘附性菌毛基因csgA在临床分离株中的携带率分别为54.5％、90.9％、18.2％、9.1％、90.9％,没检测到鼠疫菌素受体基因fyuA、Ⅰ型菌毛必须蛋白基因fimC、粘附性菌毛基因fe1A.ERIC-PCR结果显示:不同来源的菌株可属于同一克隆型,相同来源的菌株也可属于不同的克隆来源.外膜蛋白检测表明外膜蛋白缺失在大肠杆菌中十分常见,本试验中OmpC缺失更为常见,外膜蛋白缺失是造成细菌多重耐药机制的原因之一.

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