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首页> 中文会议>中华医学会急诊医学分会第十六次全国急诊医学学术年会 >小鼠脑缺血组织中自然杀伤细胞的浸润

小鼠脑缺血组织中自然杀伤细胞的浸润

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目的：1.利用C57BL/6小鼠,制作大脑中动脉栓塞模型,探讨:①缺血脑组织中是否有自然杀伤细胞浸润;②NK细胞在缺血脑组织中的浸润和聚集是否受到趋化因子干扰素诱导蛋白-10的募集作用;2.利用Rattus norvegicus(褐家鼠)肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC-12细胞)探讨:IP-10对神经细胞的作用.方法：1、线拴法建立小鼠MCAO模型,按缺血时间分为1h、6h、12h、24h、2d、6d六组;2、脑组织冰冻切片,应用免疫组化检测NK细胞在缺血脑组织中的浸润情况和IP-10的表达情况;3、PC-12细胞传代培养,根据培养条件和加入因子的不同分为:正常培养组、正常培养+IP-10组、厌氧培养组、厌氧培养+IP-10组.各组于培养6h用流式细胞仪检测凋亡细胞数目和用紫外分光光度仪测定各组细胞培养液上清乳酸脱氢酶活力,观察IP-10对神经细胞的作用.结果：1、小鼠脑缺血模型中缺血侧NK细胞数高于缺血对侧(P<0.05)，脑缺血1h在缺血脑组织中即有大量的NK细胞浸润，并在12h-2d达到高峰;随着时间延长，在5-6d浸润的阳性细胞数呈下降趋势。2、小鼠脑缺血组织中有IP-10的表达，且缺血侧阳性细胞数高于缺血对侧(P<0.05)。IP-10的表达随时间延长呈现先增高后降低再增高的趋势，出现两个高峰，分别在1h-6h,5d两个时间段。3、PC-12细胞在加入IP-10后，在正常培养条件下细胞调亡率和损伤细胞数量基本无差别;在厌氧条件下，细胞凋亡率和损伤细胞数量均较正常培养条件升高;厌氧条件下两组比较，结果显示，与单纯厌氧组相比，厌氧+1P-10组细胞凋亡率(32.1%比，3.9%)和损伤细胞数量((692.3比470.1)均增高，提示IP-10对神经细胞的损伤作用。结论①脑缺血发生之后，有大量外周NK细胞浸润脑内，参与了脑缺血损伤过程。②浸润到脑组织的NK细胞表达IFN-y具有生物活性。③在厌氧环境下，IFN-y可以增加神经细胞凋亡。1、脑缺血发生后，大量外周NK细胞穿过血脑屏障浸润到脑组织中，并参与脑缺血的病理过程。2、提示NK细胞在缺血脑组织中浸润和聚集受到趋化因子IP-10的募集作用。3、IP-10对神经细胞有损伤作用。

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