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siRNA技术抑制人胃癌细胞GHR基因对JAK2-STAT3通路影响

摘要

本文利用小分子干扰RNA(siRNA)技术抑制人胃癌MGC-803细胞人生长激素受体(GHR)基因的表达,观察GHR基因沉默后rhGH干预对MGC-803细胞增殖及JAK2-STAT3通路的影响.设计特异性siRNA,构建针对人GHR真核质粒的表达载体pGPU6/GFP/Neo-siGHR,脂质体法将干扰载体pGPU6/GFP/Neo-siGHR和空载体pGPU6/GFP/Neo转染人胃癌MGC-803细胞,G418筛选稳定转染细胞株;Western Blot检测GHR蛋白表达,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测GHR mRNA水平变化.结果表明构建的pGPU6lGFP/Neo-siGHR能有效地下调MGC-803细胞中GHR的表达,从而抑制MGC-803细胞的对rhGH促增殖活性反应性,下调JAK2-STAT3信号转导通路多个关键节点的基因表达。

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