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GCF低表达Hela细胞系的构建及辐射对其调控IER5基因表达的影响

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目的:构建、鉴定稳定转染的GCF低表达Hela细胞系.在60Coγ射线照射下探究其细胞增殖和周期改变情况以及对IER5基因表达的影响. 方法:用已构建好的GCF低表达的质粒稳定转染Hela细胞,通过G418筛选、Western Blot实验、实时定量PCR鉴定,得到GCF-shRNA-Hela单克隆细胞系.采用倒置显微镜观察细胞形态变化,利用CCK-8了解不同剂量照射后的细胞增殖计数,再用流式细胞术检测细胞周期改变情况,并在照射基础上检测GCF-shRNA-Hela及对照细胞中IER5蛋白的表达. 结果:GCF-shRNA-Hela单克隆细胞系的GCF表达在蛋白及mRNA水平抑制效果明显.从细胞形态上,GCF-shRNA-Hela单克隆细胞比正常细胞体积小,细胞间隙较大,其中梭形细胞较多.辐射会抑制GCF-shRNA-Hela和对照细胞生长且对后者的影响更大.4Gy照射后GCF-shRNA-Hela的G2/M期阻滞要弱于对照细胞,4h时阻滞最为明显.同一照射剂量下GCF沉默的细胞系中IER5的表达量比对照细胞高. 结论:本实验成功获得了低表达GCF的Hela细胞系,并验证了GCF为IER5基因的抑制性转录因子,对IER5基因的表达起抑制作用.

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来源
《中国辐射防护学会2015年学术年会》|2015年|535-541|共7页
会议地点湖南衡阳
作者
史海敏; 郭冬梅; 陈丹; 赵春丽; 刘晓丹; 王豫; 崔巍; 杨明月; 常小云; 杨川杰; 张新; 周平坤; 丁库克;
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作者单位

中国环境科学学会;

中国辐射防护学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类 R737.33:R730.2;
关键词
人宫颈癌细胞系; 转录抑制因子; 60钴γ辐射; IER5基因; 基因表达;

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