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扶正抗癌方通过调控MUC1增敏吉非替尼对肺癌的抑制作用

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目的：探讨扶正抗癌方协同吉非替尼抑制非小细胞肺癌增殖的分子机制. 方法：MTS法检测非小细胞肺癌细胞经扶正抗癌方单药及扶正抗癌方联合吉非替尼处理后的细胞活性;流式细胞术(碘化丙啶PI染色)检测非小细胞肺癌细胞经药物处理后的细胞周期变化;蛋白质印迹法检测经扶正抗癌方处理后p-Akt、Akt、p65、p50和MUC1蛋白的表达水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测经扶正抗癌方处理后MUC1在mRNA水平的表达;启动子活性检测经扶正抗癌方处理后MUC1promoter的表达水平,瞬时转染过表达Akt、p65和MUC1在非小细胞肺癌细胞中的表达水平及瞬时转染加扶正抗癌方处理后各蛋白的表达水平;裸鼠成瘤实验及小动物活体成像实验进行扶正抗癌方联合吉非替尼对肺癌作用的体内实验研究. 结果：扶正抗癌方以时间和浓度依赖性抑制非小细胞肺癌细胞(A549和H1650)增殖,联合吉非替尼后抑制作用增强;扶正抗癌方导致细胞周期阻滞在G0/G1期;扶正抗癌方抑制Akt的激活,即以时间依赖性降低其活性形式p-Akt的表达,联合吉非替尼后其抑制作用增加;扶正抗癌方以浓度依赖性抑制p65的表达,联合吉非替尼后其抑制作用更甚;扶正抗癌方以浓度依赖性抑制MUC1在蛋白、mRNA水平和promoter的表达,联合吉非替尼后其抑制作用明显增强;扶正抗癌方抑制p65表达的作用可被过表达Akt逆转、而抑制MUC1的作用又可被过表达P65逆转,同时过表达MUC1对p65的表达无影响,但可提高p-Akt的表达水平;过表达MUC1可逆转扶正抗癌方对肺癌细胞活性的抑制作用;进一步的体内实验结果显示,相较于单用扶正抗癌方或单用吉非替尼,扶正抗癌方和吉非替尼两者联合具有显著增强的抑瘤作用,同时p-Akt、p65、和MUC1蛋白的表达水平进一步受抑制. 结论：扶正抗癌方通过调控MUC1明显增敏吉非替尼对肺癌的抑制作用.

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