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hTERT、CEA及CMV启动子在人结肠癌细胞株lovo、SW480中的启动效率比较

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目的:克隆人端粒酶催化亚单位启动子(hTERTp)及癌胚抗原启动子(CEAp)的序列片段,并比较hTERT、CEA及CMV启动子在人结肠癌细胞株lovo、SW480中的启动效率。rn 方法:设计引物应用PCR法从人结肠癌基因组中克隆人端粒酶催化亚单位启动子(hTERTp)及癌胚抗原启动子(CEAp),经测序无误后,选择pLVX-EGFP-3FLAG为原始表达载体,选取酶切位点MluⅠ和XhoⅠ,联合双酶切和PCR方法切除原始载体中巨细胞病毒启动子(CMV),将上述启动子片段与pLVX-EGFP-3FLAG载体重组,构建出携带人端粒酶催化亚单位启动子(hTERTp)和癌胚抗原启动子(CEAp)的重组质粒pLVX-CEAp-EGFP-3FLAG和pLVX-hTERTp-EGFP-3 FLAG,将上述两种质粒连同原始表达载体pLVX-EGFP-3FLAG(含CMV启动子)分别瞬时转染人结肠癌细胞株lovo、SW480,检测两种细胞株的荧光表达强度。rn 结果:琼脂糖凝胶电泳显示PCR克隆的hTERT启动子片段长度为327bp, DNA测序结果与GenBank(AN 097365)中hTERT启动子DNA序列完全一致;同样方法克隆的CEA启动子片段长度为369bp,DNA测序结果与GenBank (NT O11109)中CEA启动子DNA序列完全一致。将上述克隆片段连接到不含CMV启动子的表达载体pLVX-EGFP-3FLAG上，双酶切、PCR鉴定及DNA序列分析无误。将 pLUX-CEAp-EGFP-3FLAG , pLVX-hTERTp-EGFP-3FLAG及pLVX-EGFP-3FLAG分别瞬时转染人结肠癌细胞lovo, SW480，示:在lovo细胞中:CMV启动子的启动效率约为54.7%, HTERT启动子的启动效率约为33.0%, CEA启动子的启动效率约为9.5%;在SW480中:CMV启动子的启动效率约为16.5%, HTERT启动子的启动效率约为10.1%, CEA启动子的启动效率约为8.5%，在上述两种细胞中，三种启动子的启动效率差异有统计学意义(P<0.05)。rn 结论:在人结肠癌细胞株lovo, SW480中，CMV启动子的启动效率最高，HTER7，启动子启动效率次之，CEA启动子启动效率最低。

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来源
《2012重庆国际肝胆外科论坛暨第十八届中国普外基础与临床进展学术大会》|2012年|134|共1页
会议地点重庆
作者
贺赛; 孙学军; 郑见宝; 陈南征; 任燕飞; 王炜; 石景森;
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作者单位

重庆医科大学附属第一医院;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类 R735.3:R730.21;
关键词
结肠癌; 细胞株; 启动子; 启动效率; 比较分析;

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