基于TaqMan探针的牛布氏杆菌实时荧光定量PCR的特异性鉴定

摘要

目的:牛布氏杆菌病(布病)是一种由布氏杆菌引起的人畜共患传染病,世界动物卫生组织(OIE)列为B类传染病,是国际贸易检疫中必检的传染病,我国将它列为B类传染病.加强牛布氏杆菌病检测,扑杀阳性牛是控制牛布氏杆菌病的关键措施之一.rn 方法:本研究选取高度保守的布氏杆菌属特异性的BM28基因序列,利用Primer Express 3.0软件进行引物和探针的设计。rn 结果:5个稀释度的范围内定量PCR有S型扩增曲线,符合定量PCR的Ct值与起始拷贝数之间严格的线性关系。通过对扩增曲线的分析,检测的R2值达到0.999。因此,标准曲线在5.O×105拷贝~5.O×l01拷贝每微升范围内呈现良好的线性关系,表明本实验绘制的标准曲线可以达到试验要求。rn 结论:实时荧光定量PCR检测方法是近年来应用较为普遍的一种快速检测方法,具有快速、准确的优点,适用于出入境动物产品的快速检测和排查。本研究从引物探针设计、模板纯化,PCR程序设计等方面进行了优化,建立了较为完善牛布氏杆菌病的鉴定检测方法,对布氏杆菌病的普查监测,以及进出口活动物及其产品的检验检疫具有重要的意义。

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