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节杆菌乙醇脱氢酶A1R6C3基因的克隆与原核表达

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目的:本研究对可能参与苦马豆素(swainsonine,SW)降解的依赖NADP-乙醇脱氢酶A1R6C3基因AAur-2040进行克隆与原核表达.rn 方法:以HW08菌基因组DNA为模板克隆AAur-2040基因,构建原核表达载体,SDS-PAGE电泳检测构建的乙醇脱氢酶重组菌蛋白,通过带His标签的Ni柱纯化乙醇脱氢酶, Western blot鉴定乙醇脱氢酶的表达情况,气相色谱检测该酶降解SW能力.rn 结果:从HW08菌中克隆得到了基因AAur-2040,成功构建了表达载体pET32a-AAur-2040,表达蛋白与预期蛋白大小一致,约56KDa;Ni柱亲和层析纯化出的乙醇脱氢酶通过Western blot检测融合蛋白成功表达,气相色谱检测乙醇脱氢酶可在1 h内降解18.52 μg的SW,降解率为46.3％0.rn 结论:这一结果为接下来乙醇脱氢酶的特性研究及节杆菌HW08降解SW的机理研究奠定了基础.

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来源
《中国畜牧兽医学会动物毒物学分会第十四次学术研讨会》|2015年|99-103|共5页
会议地点大庆
作者
王妍; 翟阿官; 李勤凡; 赵宝玉; 王建华;
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作者单位

中国畜牧兽医学会动物毒物学分会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类家畜生物化学;
关键词
动物医学; 节杆菌; 乙醇脱氢酶; A1R6C3基因; 基因克隆; 原核表达; 苦马豆素;

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