- 作者：Liang Shuang,梁爽,Xiang Daijun,向代军,苑晓舟,Yuan Xiaozhou,姜文灿,Jiang Wencan,Ge Sujun,葛素君,Wang Chengbin,王成彬,Ma Junlong,Xue Dandan,Liu Peipei,Liu Ping,Li Xinjun,
- 会议名称：中国医学装备协会第26届学术与技术交流年会
- 2017年
摘要：目的：通过免疫共沉淀结合质谱分析技术筛选与不育症患者血清中抗精子抗体结合的精子蛋白,从而进一步揭示抗精子抗体相关免疫性不育的机制.rn 方法：首先利用ELISA试剂盒进行抗精子抗体阳性血清的筛选,再采用混合抗球蛋白试验(MAR)对抗精子抗体阳性血清进行确认.收集正常人精液,提取精子膜蛋白,然后进行免疫共沉淀反应,分别将抗精子抗体阳性血清、抗精子抗体阴性血清与精子膜蛋白孵育后,同时加入protein A/G孵育,利用SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)对免疫沉淀复合物进行分离,切胶酶解后,进行液相色谱结合二级质谱(LC-MS/MS)分析,得到相应的蛋白质ID.通过搜索UniProt数据库检索查找这些蛋白的名称、生物学功能、细胞定位等信息.rn 结果：筛选出抗精子抗体阳性不育患者血清56例(女性39例、男性17例),抗精子抗体阴性正常生育者血清31例(女性17例、男性14例).共鉴定出40种相关蛋白,可分为3组蛋白,分别是：①仅与正常组血清相结合的蛋白(11种);②既与正常组血清结合,也与抗精子抗体阳性不育组血清结合的蛋白(14种);③仅与抗精子抗体阳性不育组血清结合的蛋白(15种).15种可能与免疫性不育相关的候选精子蛋白分别是精子阳离子通道蛋白家族成员(Cationchannel sperm-associated protein1、3、4,CatSper1,CatSper3,CatSper4),精子相关抗原9(Sperm associated antigen9,SPAG9),载脂蛋白A-I(Apolipoprotein A-I,APOA-I),轴丝动力蛋白重链14(Dynein heavy chain14,DNAH14),Cylicin-2(CYLC2),精卵融合蛋白4(Izumo sperm-egg fusion protein4,Izumo-4),硫氧还蛋白结构域蛋白2(Thioredoxin domain-containing protein2,Txndc2),IQ domain-containing protein H(IQCH),IQ domain-containing proteinF1(IQCF1),精子发生相关蛋白5(Spermatogenesis-associated protein5,SPATA5),SPATA5L1,精子顶体膜相关蛋白1(Sperm acrosome membrane-associated protein1,SPACA1),E3泛素蛋白连接酶RNF114(E3ubiquitin-protein ligase RNF114,RNF114).rn 结论：利用免疫共沉淀联合液相色谱串联质谱分析技术筛选出15种免疫性不育相关的候选蛋白,其参与精子发生、精卵融合、顶体反应等受精中关键过程,进一步深入研究对揭示男性生殖有重要意义.
