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复肝宁对免疫性肝纤维化雄鼠肝组织中TGF-β1和bFGF表达水平的影响

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前言

一 立题依据

1 传统医学对肝纤维化的认识与研究

1.1 病因病机

1.2 中医药治疗肝纤维化研究进展

1.3 小结

2 现代医学对肝纤维化的认识与研究

2.1 肝纤维化概述

2.2 病因

2.3 发生机制

2.4 肝星状细胞与细胞外基质

2.5 肝星状细胞(HSC)的活化

2.6 肝纤维化的治疗进展

二 实验研究

1 实验材料

1.1 实验动物

1.2 实验药品

1.3 实验试剂及配制

1.4 实验仪器和设备

2 实验方法

2.1 动物分组

2.2 动物喂养

2.3 模型建立

2.4 给药

2.5 标本采集和处理

2.6 观察指标和测定方法

2.7 统计学方法

3 结果

3.1 一般情况观察

3.2 各组大鼠体重

3.4 各组大鼠体重增长率

3.5 各组大鼠肝系数水平

3.6 各组大鼠肝组织中TGF-β1水平

3.7 各组大鼠肝组织中bFGF水平

3.8 各组大鼠肝组织形态学变化

三 讨论

1 动物模型的复制与评价

2 对照药物的选择

2.1 秋水仙碱

2.2 鳖甲煎丸

3 复肝宁组方及方证原理

4 实验结果分析

4.1 复肝宁煎剂对实验大鼠体重以及肝系数的影响

4.2 复肝宁煎剂对TGF-β1影响

4.4 复肝宁煎剂对肝组织病理影响

四 结语

1 结论

2 问题与展望

参考文献

致谢

附录1 肝组织HE病理图片(HE染色20×)

附录2 肝组织masson病理图片(Masson染色20×)

附录3 实验动物合格证

附录4 动物实验设施使用证

附录5 读硕期间发表论文

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摘要

目的:通过观察复肝宁煎剂(FD)对猪血清诱导肝纤维化大鼠肝组织中转化生长因子(TGF-β1)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达水平以及组织形态学的影响,探讨本方通过抑制TGF-β1和bFGF表达水平而发挥抗肝纤维化作用机理,并为其防治肝炎后肝纤维化乃至肝硬化的临床应用提供理论及实验依据。
  方法:将成年雄性SPF大鼠84只随机分为7组,分别为空白组(N)、模型组(M)、秋水仙碱对照组(C)、鳖甲煎丸对照组(B)、复肝宁高剂量治疗组(FD-HD)、复肝宁中剂量治疗组(FD-MD)和复肝宁低剂量治疗组(FD-LD)。除正常组外,其余各组大鼠均采用腹腔注射猪血清造模方法,模型成功后给予相应剂量药物灌服,N组灌服同体积双蒸水,每周称重一次。10周后,处死动物,采集肝组织标本。计算体重增长率以及肝系数,用酶联免疫法(ELISA法)测定肝组织中TGF-β1和bFGF含量,光镜下观察肝组织病理形态学改变。
  结果:1.第6周治疗开始直至第十周治疗结束,N组大鼠体重呈正增长,而FD-LD组大鼠体重和M组大鼠体重已呈负增长趋势,FD-HD组大鼠无显著性变化,其余各组大鼠体重均呈不同程度的正增长;2.第6周到第10周(即治疗前与治疗后相比),各组增长率按统计学分析,与N组比较,M组有显著性差异(P<0.01);与M组对比,FD-HD组有统计学意义(P<0.05),FD-MD组和C组均有显著性差异(P<0.01);与C组相比,FD-LD组有统计学意义(P<0.05);3.与N组相比,M组肝系数有显著性差异(P<0.01);与M组大鼠相比,C组肝系数无统计学意义,FD-HD、FD-MD组以均有显著性差异(P<0.01),B组和FD-LD组有统计学意义(P<0.05);与C组对比,FD-HD组有统计学意义(P<0.05),FD-MD有显著性差异(P<0.01);4.与N组对比,M组TGF-β1明显升高(P<0.01);与M组对比,各治疗组均有显著性差异(P<0.01);与M组对照,FD-HD有统计学意义(P<0.05),FD-MD有显著性差异(P<0.01);与B组对照,FD-HD、FD-MD组均有显著性差异(P<0.01);5.与N组对比,M组bFGF含量明显升高(P<0.01);与M组对比,C、B组均有统计学意义(P<0.05),FD-HD、FD-MD、FD-LD组均有显著性差异(P<0.01);与C组对照,FD-MD组有统计学意义(P<0.05);与B组对照,FD-MD组有统计学意义(P<0.05);6.病理观察显示,与N组相比,M组肝小叶破坏严重,纤维细胞自每个汇管区出发将正常肝组织分割为若干区域,假小叶已出现。C组与B组纤维细胞包绕汇管区以及周边肝组织程度已减轻,接近汇管区的纤维组织仍然较厚。FD-HD组中汇管区纤维组织分布情况已接近 N组,但周围肝细胞有不同程度损伤,FD-MD组纤维组织分布较FD-HD多,但无统计学意义,FD-LD组中汇管区及周边仍有较多纤维索,整体上纤维索的长度与厚度均小于M组,但大于其它各治疗组。
  结论:本实验证明:复肝宁煎剂能有效降低猪血清诱导肝纤维化大鼠肝组织中TGF-β1和bFGF的含量。提示复肝宁煎剂作用机理之一可能是通过抑制肝组织中TGF-β1和bFGF的表达水平,发挥了直接或间接降低肝组织中细胞外基质(ECM)的含量的作用,从而可有效阻止肝炎后肝纤维化(HF)的形成。

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