鹿源牛结核分枝杆菌ESAT-6、Ag85b蛋白的表达与纯化及抗原特异性研究

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摘要

英文缩略表

第一章 引言

1．1 结核病概述

1．2 分子病原学特征

1．2．1 ESAT-6蛋白特性

1．2．2 Ag85b蛋白特性

1．3 鹿结核病的诊断

1．3．1 病理剖检

1．3．2 病原学检测方法

1．3．3 结核菌素皮内试验

1．3．4 血清学检测方法

1．3．5 分子生物学诊断

1．4 研究内容

第二章 牛分枝结核杆菌ESAT-6的表达与纯化

2．1 材料

2．1．1 牛结核分枝杆菌基因模板

2．1．2 载体和菌种

2．1．3 主要仪器和试剂

2．1．4 溶液及培养基的配制

2．2 方法

2．2．1 基因模版的制备

2．2．3 基因的克隆与鉴定

2．2．4 表达载体的构建

2．2．6 ESAT-6表达与鉴定

2．2．7 目的蛋白的纯化

2．2．8 ESAT6的特异性检测

2．3 结果

2．3．3 重组质粒EsAT6-pNC-HisE的酶切鉴定结果

2．3．4 表达菌株的鉴定

2．3．5 EMG1工程菌ESALT-6的表达与鉴定

2．3．6 目标蛋白的纯化

2．3．7 ESAT-6特异性检测结果

2．4 讨论

第三章 牛结核分枝杆菌Ag85b的表达与纯化

3．1 材料

3．1．1 牛型结核分枝杆菌基因模板

3．1．2 载体和菌种

3．1．3 主要仪器和试剂

3．1．4 溶液及培养基的配制

3．2 方法

3．2．1 基因模版的制备

3．2．4 Ag85b基因表达载体的构建

3．2．5 表达载体Ag85b-pNC-HisE转化宿主菌(枯草杆菌)

3．2．6 蛋白的表达与鉴定

3．2．7 目的蛋白的纯化

3．2．8 Ag85b的特异性检测

3．3 结果

3．3．1 PCR结果

3．3．3 重组质粒Ag85b-pNC-HisE的酶切鉴定结果

3．3．4 表达菌株的鉴定

3．3．5 培养基优化结果

3．3．6 蛋白表达的Western Blot分析结果

3．3．7 目标蛋白的纯化

3．3．8 Ag85b特异性检测

3．4 讨论

第四章 全文结论

参考文献

致谢

作者简历