gp350基因与gp350-C3d3融合基因真核表达质粒的构建表达及其功能的初步研究

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EB 病毒是全世界流行的γ型人类疱疹病毒，具有嗜B 淋巴细胞性，病因学上与中国南方地区及东南亚的未分化型鼻咽癌(uNPC)、非洲赤道地区的BurkitT淋巴瘤关系密切，这两种疾病在其他地区却比较少见。
　　目前EB 病毒及其相关肿瘤的治疗方法依然有限，鉴于病毒在这些疾病的发病机制中所扮演的重要角色，采用EB 病毒蛋白抗原的分子干预措施可能是预防治疗EB病毒相关疾病的有效措施。在这些方案中，疫苗接种免疫应该是研究中的首要选择，在本课题中，我们通过基因工程技术构建了gp350和C3d3的融合质粒，希望表达的融合蛋白在进一步研究中具有特异的免疫原性。
　　目的:构建EB 病毒包膜糖蛋白gp350全长序列及其与三个补体片段C3d 串联基因在人体真核细胞中表达的载体，并进行其免疫功能的初步研究。
　　方法:以pcDNA3.1+gp350为模板PCR 扩增出gp350cDNA 全长片段，将PCR 产物经BglⅡ和BamHⅠ酶切消化后与经同样两个限制性内切酶消化的真核表达载体pSG.SS.YL和pSG.SS.C3d3.YL 连接，转化后挑取阳性克隆进行PCR、酶切鉴定并测序；然后将纯化的重组载体用脂质体法分别转染人类Hela细胞培养24h，分别用Western blot及细胞免疫化学染色检测gp350蛋白和gp350-C3d3 融合蛋白的表达。
　　结果:成功构建含gp350全长基因序列的载体pSG.SS.gp350.YL和pSG.SS.
　　 Gp350.C3d3.YL；转染人类Hela细胞后，经细胞免疫化学染色及Western blot 检测显示：
　　转染组均能常规水平表达，对照组则无该蛋白表达，但两转染组的表达量无明显差异。
　　结论:成功构建gp350的两个真核表达质粒，并能够在人体Hela细胞中表达相应蛋白，为下一步进行在体内免疫环境下检测其生物学活性奠定基础。

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作者
宋天喜;
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作者单位

第三军医大学;

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授予单位第三军医大学;
学科耳鼻咽喉科学
授予学位硕士
导师姓名杨桦;
年度 2011
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类其他病毒;
关键词
融合基因; 真核表达质粒; 细胞免疫化学; 融合蛋白; 病毒; 免疫化学染色; 转染; 真核表达载体; 限制性内切酶消化; 全长; 其生物学活性; 检测; 相关疾病; 包膜糖蛋白; 重组载体; 治疗方法; 脂质体法; 真核细胞; 预防治疗; 阳性克隆;

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