首页> 中文学位 >噬菌体展示技术筛选与褐飞虱中肠刷状缘膜囊泡结合短肽
【6h】

噬菌体展示技术筛选与褐飞虱中肠刷状缘膜囊泡结合短肽

代理获取

目录

文摘

英文文摘

1 前言

1.1 苏云金芽胞杆菌

1.1.1 苏云金芽胞杆菌概述

1.1.2 Cry蛋白的杀虫机制

1.2 噬菌体展示技术

1.2.1 噬菌体展示技术概述

1.2.2 噬菌体展示技术的应用

1.3 绿色荧光蛋白

1.3.1 绿色荧光蛋白概述

1.3.2 绿色荧光蛋白的应用

1.4 稻飞虱的危害与主要防治措施

1.5 本研究的目的及意义

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 供试昆虫

2.1.2 菌株与载体

2.1.3 培养基

2.1.4 试剂盒与反应体系

2.1.5 其他试剂和材料

2.2 方法

2.2.1 提取刷状缘膜囊泡BBMV

2.2.2 噬菌体肽库淘选实验

2.2.3 构建克隆载体

2.2.4 构建表达载体

2.2.5 诱导表达

2.2.6 蛋白提纯

2.2.7 SDS-PAGE验证

2.2.8 膜饲法观察结合情况

3 结果和分析

3.1 BBMV提取结果

3.2 噬菌体肽库淘选结果

3.3 克隆结果

3.3.1 PCR反应结果

3.3.2 单双酶切验证结果

3.4 融合蛋白诱导和提纯结果

3.5 融合蛋白与中肠结合情况

4 讨论

参考文献

致谢

展开▼

摘要

解剖1000头褐飞虱5龄若虫,获取中肠部位,研磨后梯度离心得到刷状缘膜囊泡BBMV,运用噬菌体展示技术筛选与BBMV特异结合的短肽,通过PCR扩增连接短肽序列和绿色荧光蛋白GFP序列,将重组序列先后连接到克隆载体pMD18-T和表达载体pET-32a,并分别转化大肠杆菌JM109和BL21,最后用IPTG诱导表达重组序列,得到大小约45KDa的融合蛋白,利用表达载体pET-32a的组氨酸标签提纯融合蛋白。
   通过膜饲喂方法以融合蛋白喂食褐飞虱5龄若虫,解剖得到中肠,将中肠在PBS溶液中清洗后转移至荧光显微镜下用蓝紫光观察,结果显示融合蛋白可以结合到褐飞虱的中肠。

著录项

相似文献

  • 中文文献
  • 外文文献
  • 专利
代理获取

客服邮箱:kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备:11010802029741号 ICP备案号:京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有
  • 客服微信

  • 服务号