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人类牙齿早期发育相关基因片断的克隆及其表达

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序言

第一部分文献综述

1牙齿发育的形态变化过程

2上皮与间充质之间相互作用的信号传导机制

3小白鼠牙齿发育中上皮和间充质之间相互作用的信号回路

3.1生长因子在早期牙齿发育中的表达

3.2转录因子的表达与诱导过程是密切相关

4Shox

第二部分材料与方法

1材料

1.1主要仪器

1.2主要药品

1.3菌株和载体

1.4软件

1.5常用培养基和缓冲液

2方法

2.1序列分析

2.2引物设计以及合成

2.3人基因组DNA提取

2.4 PCR扩增

2.5 PCR产物的克隆

2.6克隆鉴定

2.7序列测定及BLAST

2.8转录RNA探针

2.9 RNA电泳

2.10 RNA纯化

2.11胚胎收集、切片及原位杂交

第三部分结果与分析

1 PCR结果

2酶切鉴定

3测序结果的相似性比较

4模板制备

5 RNA转录

6原位杂交结果

第四部分小结与讨论

1利用PCR快速克隆特异性的基因片断

2人类早期牙齿发育基因表达的初步探讨

参考文献

附录

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摘要

对小白鼠牙齿发育的分子生物学机制已经进行了大量的基础性研究工作,但是对人类牙齿发育的分子生物学机制目前还未有报道。本文率先在人类的早期牙胚中检测几种关键信号因子的表达。主要研究工作包括设计Shox2、Msx1、Pax9、Pitx2和Fgf8的特异性引物;从基因组直接克隆人的Shox2、Msx1、Pax9、Pitx2和Fgf8的基因特异性片段;转录Shox2、Pitx2和Fgf8的反义mRNA探针;原位杂交检测Shox2、Pitx2和Fgf8在人类早期牙齿发育过程中的表达;原位杂交检测Shox2在早期上颚的表达情况。在9周的人类第一磨牙牙胚的原位杂交显示Fgf8只在乳牙上皮表达,而且局限在釉结节,在恒牙上皮中并没有表达。而Pitx2在整个乳牙上皮都有强烈的表达,在恒牙上皮中也有表达。Shox2在乳牙上皮和间充质都有表达,在9周的恒牙上皮中,Shox2也有表达。Shox2和Pitx2与同期的小白鼠表达的部位一致。Fgf8在恒牙牙蕾与小白鼠牙蕾表达情况一致,但是在乳牙帽状期的表达情况与小白鼠不同。Shox2在6周的上颚前端有表达,而后端没有表达,与小白鼠的表达情况一致。

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