Calpain家族对肝癌细胞耐受阿霉素促凋亡作用及迁移能力的影响

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目的：观察阿霉素（ADM）作用下肝癌细胞（HepG2）钙激活中性蛋白酶（Calpain）家族的促凋亡作用和表达水平的影响，以及Calpain家族对肝癌细胞迁移能力的影响，进一步认识肝癌发生的分子机制，为临床肝癌的防治提供依据。
　　方法：
　　第一部分：Calpain家族对肝癌细胞耐受ADM促凋亡作用的影响
　　采用人HepG2肝癌细胞系为模型细胞，常规细胞培养；通过MTT法观察ADM对HepG2肝癌细胞的抑制效应；通过蛋白免疫印迹法（Western blot）分析ADM对 HepG2肝癌细胞 Calpain-1及 Calpain-2表达水平的影响；采用 Calpain-2抑制剂 Calpastatin peptide预处理模型细胞，观察 Calpastatin peptide对ADM诱导HepG2肝癌细胞凋亡及Calpain-2、Src表达水平的影响。
　　第二部分：Calpain家族对肝癌细胞迁移能力的影响
　　采用人肝细胞来源的5株细胞系HepG2、MHCC97-H、Changliver、Hep3B2.1.7、LM3为模型细胞，常规细胞培养；通过 Western blot法分析不同转移能力肝细胞系中 Calpain-1、Calpain-2、Calpastatin及 Src的表达水平；采用Calpastatin peptide预处理模型细胞MHCC97-H，通过划痕实验观察高转移肝癌细胞MHCC97-H的迁移能力；并采用Western blot法分析Calpastatin peptide对MHCC97-H细胞的Calpain-1、Calpain-2、Src表达及剪切活性。
　　结果：
　　第一部分
　　（1） ADM对HepG2细胞有明显的抑制作用，其半数抑制浓度为2.5μmol/L；
　　（2） ADM对HepG2细胞Calpain-1及Calpain-2表达的影响均表现为先降低（0.5h，1h，4h）后升高（12h，24h，48h，72h），有统计学意义；其相应的低分子量片段（LMW）也呈现出先降低（0.5h，1h，4h）后升高（12h，24h，48h，72h）的变化，均有统计学意义；
　　（3） Calpain-2抑制剂Calpastatin peptide促进ADM对HepG2细胞凋亡诱导作用，与只用Calpastatin peptide的HepG2细胞组比较P<0.05或P<0.01；且Calpastatin peptide抑制ADM处理组及非处理组对Calpain-2及Src表达的上调。
　　第二部分
　　（1）不同转移能力的肝细胞系中，Calpain-1的表达及相应 LMW产生变化不大；Calpain-2及 Calpastatin的表达在两株高转移肝癌细胞系（MHCC97-H、LM3）中明显上调，其剪切成为LMW也明显增多；Src在两株高转移肝癌细胞系（MHCC97-H、LM3）中的表达明显增高，尤其在MHCC97-H细胞中；
　　（2）Calpain-2抑制剂 Calpastatin peptide明显抑制高转移肝癌细胞MHCC97-H的迁移；
　　（3）Calpastatin peptide使高转移肝癌细胞MHCC97-H Calpain-2及Src的表达下调，Calpain-1的表达没有明显变化。
　　结论：
　　（1）ADM长时间(12-72h)作用下，促进HepG2细胞的凋亡，并上调Calpain-1和Calpain-2的表达，相应的低分子量片段也增加。
　　（2）Calpain-2的表达上调和低分子量片段的增多帮助肝癌细胞耐受阿霉素的促凋亡作用。
　　（3）Calpain-2的表达上调和低分子量片段的增多增强肝癌细胞的迁移能力。
　　（4）Calpain-2有可能通过 Src介导的信号通路增强肝癌细胞对阿霉素促凋亡的耐受能力，及增强肝癌细胞的迁移能力。

著录项

作者
唐佳艳;
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作者单位

贵阳医学院;

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授予单位贵阳医学院;
学科消化内科
授予学位硕士
导师姓名周力,洪阳;
年度 2011
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类肝肿瘤;
关键词
钙激活中性蛋白酶; 肝癌细胞; 阿霉素; 分子机制; 迁移能力;

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