产肠毒素性大肠杆菌致病特性及益生菌的筛选与疾病控制研究

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产肠毒素性大肠杆菌(EnterotoxigenicEscherichiacoli.，ETEC)是一类引起人和幼畜(初生仔猪、犊牛、羔羊)腹泻的重要病原菌，初生幼畜被ETEC感染后，常因剧烈水样腹泻和迅速脱水而死亡，发病率和死亡率均很高，给养殖业带来严重的经济损失。目前，通过在饲料中添加抗生素进行防治是一条最主要的途径。但近些年来，抗生素的由于耐药性、安全性等问题遭到了广泛的置疑和反对，世界上很多国家都对饲料中添加抗生素实行了禁用或限用。益生素(Probiotics)由于“无毒”、“无抗药性”、“无残留”、“无副作用”的特点，逐渐成为国内外饲料添加剂研究的热点。本文利用绿色荧光蛋白(Greenfluorescentprotein)标记技术研究ETEC致病特性及筛选益生菌在体内、体外进行抑制致病菌研究，主要结果如下： 1.通过电击转化法，将带有gfp标记基因的pGLO质粒成功转化到产肠毒素性大肠杆菌K88中，经过紫外检测及荧光显微镜检测均发现标记菌株发出绿色荧光。进一步通过分子鉴定、脂肪酸分析、血清学鉴定发现标记菌株和原始菌株没有差异。同时研究在不同微生物学培养条件如：温度、pH值、盐浓度培养条件下，标记菌株的生长状态和原始菌株一致。 2.建立小白鼠K88、K88-GFP攻毒模型，K88的LD50为5.53×108CFU/mL，K88-GFP的LD50为4.86×108CFU/mL。同时利用标记菌株自发荧光的特点研究感染K88-GFP小白鼠的各器官致病菌的定植情况，发现在肝、肾中细菌最多，同时在脑、肌肉中也有少量分布。并且分析感染K88的小白鼠的血液成分、血生化指标的变化。K88对白细胞及相关指标的影响较大，WBC、W-SCC、W-LCC显著降低；对红细胞及相关指标的影响较小，仅在6hRBC、HCT、HGB降低；对血小板也有影响，PLT显著下降，MPV有所升高。K88对血液生化指标中反应肝、肾功能的指标影响较大，ALT、AST和BUN、UA显著升高，而对反应脂代谢的指标无影响，TCHO、TG与对照组相比无差异。 3.从土壤中筛选到的一株芽孢杆菌对K88、鸡大肠杆菌、沙门氏菌有抑制作用，通过对其表型特征、生理生化特征、脂肪酸分析和16SrDNA序列分析的多相分类研究，初步确定该菌株为短芽孢杆菌(Brevibacillusbrevis)。 4.在研究发酵动态对PBJK-2体外抑制K88、K88-GFP的影响时发现，30℃、pH值7.5、发酵24h的原液，同时接入PBJK-2的抑菌效果最好。在对感染K88-GFP的小白鼠模型的疾病控制研究时发现，腹腔注射PBJK-2的小白鼠LD50是不添加PBJK-2的对照组LD50的1.34倍，延缓了小白鼠的死亡，具有一定的保护作用。由此可见，短芽孢杆菌PBJK-2在体内、体外都能对K88起到抑制作用。本文表明利用GFP标记技术可以方便地检测K88-GFP在小白鼠体内的各器官定植及致病情况，为研究ETEC致病特性提供一种有效工具。研究表明致病菌可能具有侵袭性可以感染多种器官，感染的小白鼠血液组分中红细胞、白细胞及相关指标降低，与对照组有显著差异并且通过对血液生化指标研究发现对肝、肾功能有严重损坏。同时，从土壤中筛选到一株短芽孢杆菌PBJK-2，研究发现对K88体内、外都有抑制作用，这对开发益生菌新品种、了解益生素与致病菌的互作机理有具有重要的理论和实践意义。

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作者
朱红梅;
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作者单位

厦门大学;

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授予单位厦门大学;
学科发育生物学
授予学位硕士
导师姓名周涵韬;
年度 2006
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类饲料添加剂;
关键词
产肠毒素性大肠杆菌; 致病特性; 绿色荧光蛋白; 益生素; 致病菌; 互作机理; 饲料添加剂;

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