首页> 中文学位 >贯叶金丝桃素衍生物对淀粉样前体蛋白水解途径的影响
【6h】

贯叶金丝桃素衍生物对淀粉样前体蛋白水解途径的影响

代理获取

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章 前言

1.阿尔茨海默症(Alzheimer's disease)

2.淀粉样前体蛋白(Amyloid precursor protein,APP)与AD

2.1 APP的分子生物学特征

2.2 APP的生物学功能

2.3 APP的水解加工

3.APP水解酶

3.1 β-分泌酶

3.2 γ-分泌酶

3.3 α-分泌酶

4.AD药物开发的现状与进展

5.蛋白激酶C(Protein kinase C,PKC)与AD之间的关系

6.天然植物提取物治疗AD的进展

7.贯叶金丝桃素的药理作用及其研究现状

8.本论文研究的目的、内容与意义

第二章 材料与方法

1.实验材料与仪器

1.1实验材料

1.2主要试剂的配制

1.3仪器与设备

2.实验方法

2.1 SD大鼠原代神经元细胞的培养方法

2.2 MAP-2细胞免疫组化染色鉴定神经元细胞

2.3 MTT法测定细胞生长活力

2.4 Western blot检测(8H)-Ac-HF和Ac-HF对APP,BACE1和ADAM10蛋白表达的影响

2.5 ELISA检测Ac-HF和(8H)-Ac-HF对sAPPα分泌的影响

2.6 α-分泌酶活性检测

2.7统计学分析

第三章 结果分析

1.SD大鼠大脑皮层原代神经元细胞的培养和鉴定

2.Ac-HF和(8H)-Ac-HF药物浓度的确立

3.Ac-HF和(8H)-Ac-HF对皮层神经元细胞sAPPα分泌的时效性影响

4.Ac-HF和(8H)-Ac-HF对皮层神经元细胞sAPPα分泌的剂量效应

5.Ac-HF和(8H)-Ac-HF对APP,BACE1,ADAM10表达的影响

6.Ac-HF和(8H)-Ac-HF对α-分泌酶活性的影响

7.PKC参与了Ac-HF和(8H)-Ac-HF对sAPPα的促进作用

8.PKC参与了Ac-HF和(8H)-Ac-HF对ADAM10,α-分泌酶活性的上调作用

9.小结

第四章 综合讨论

附录

参考文献

致谢

展开▼

摘要

阿尔茨海默氏症(Alzheimer's disease,AD)是以进行性认知和记忆减退为特征的神经退行性疾病。其发病原因和机制到目前为止尚未阐明,目前较公认的淀粉样级联假说认为β-淀粉样蛋白(β-amyloid peptide,Aβ)是AD的一个关键起始因素,Aβ的过度聚集可以引发一系列的神经毒性,并最终导致AD发生。而Aβ是淀粉样前体蛋白(Amyloid precursor protein,APP)水解代谢产物。当前药物研发的热点之一便是寻找能够抑制Aβ产生的药物。
   贯叶金丝桃素(Hyperforin,HF)是贯叶连翘(Hypericum perforatum L.)提取物中的有效成分之一,是目前天然植物的研究热点。有研究表明HF能够减少Aβ的神经毒性以及改善记忆认知功能,但其对APP具体水解调控及机制还缺乏深入研究。HF对光,热,氧气极为敏感,常温下极易氧化,其不对稳定性对其深入研究和药用开发造成了一定困难。因此以HF为先导化合物进行结构修饰与改造,得到化学结构稳定,毒副作用小的抗AD药物具有重要的应用价值。
   贯叶金丝桃素乙酸酯(hyperforin acetate,Ac-HF)和八氢贯叶金丝桃素乙酸酯(octahydrohyperforin acetate,(8H)-Ac-HF)是贯叶金丝桃素的脂溶性衍生物,具有比原型更为稳定的理化性质。本实验室前期研究发现,Ac-HF在神经母瘤细胞SH-SY5Y中能够调节APP代谢,增加sAPPα的生成,但其在神经元细胞中的作用及其具体机制还需要进一步探讨,同时(8H)-Ac-HF的药理作用及机制也未见任何报道。
   目的:探讨Ac-HF和(8H)-Ac-HF对皮层原代神经元细胞中APP水解调控的影响及其作用机制。
   方法:建立SD大鼠皮层原代神经元细胞体外培养体系,通过MTT实验检测Ac-HF和(8H)-Ac-HF对原代神经元细胞的生长活力影响;利用ELSIA技术检测Ac-HF和(8H)-Ac-HF对原代神经元细胞培养上清液sAPPα分泌的影响;采用Western blot技术检测药物对APP及其水解途径重要蛋白BACE1,ADAM10表达的影响;同时检测药物对α-泌酶活性的影响;通过蛋白激酶C抑制剂CalphostinC(Cal.C)观察两种药物可能作用的信号靶点。
   结果:MTT结果显示:0-10μmol/L Ac-HF和0-50μmol/L(8H)-Ac-HF处理皮层神经元30h对细胞生长活性并没有影响;ELSIA结果显示Ac-HF和(8H)-Ac-HF可以促进神经元细胞sAPPα的胞外分泌水平,并且呈现出时间和浓度相关性。并且10μmol/L Ac-HF在18 h,50μmol/L的(8H)-Ac-HF在24 h对于神经元细胞sAPPα的促分泌作用效果最为明显,与对照组相比,sAPPα分别增加至1.9倍(P<0.01)和2.5倍(P<0.01)。Western blot结果表明Ac-HF和(8H)-Ac-HF可以上调ADAM10表达,但对APP和BACE1的表达没有显著性影响;α-分泌酶活性检测结果表明10μmol/L Ac-HF和50μmol/L(8H)-Ac-HF在24h可使神经元细胞中的α-分泌酶活性分别增加至1.36倍(P<0.01)和1.53倍(P<0.01);在作用机理的研究中,0.5μmol/L蛋白激酶C(PKC)抑制剂Calphostin C(Cal.C)预处理细胞2 h后可阻断两种药物对sAPPα、ADAM10和α-分泌酶的上调作用。
   结论:本研究在建立皮层神经元原代培养技术的基础上,检测了两种HF衍生物对APP水解途径的影响。Ac-HF和(8H)-Ac-HF可有效增加α-分泌酶的活性,使APP更多地经非淀粉样途径水解,并能够增加具有神经营养作用的sAPPα的胞外分泌水平。进一步研究表明,其作用是通过PKC介导,调节APP加工,增强α-分泌酶的活性,增加ADAM10表达,进而使APP通过非Aβ途径水解,既减少了Aβ的神经毒性,又促进了具有神经营养作用的sAPPα的分泌。实验证据表明Ac-HF和(8H)-Ac-HF保留了HF的抗AD药理作用,并且理化性质更为稳定,脂溶性更强。两种药物调控APP水解及作用机制相似,(8H)-Ac-HF较Ac-HF作用更加明显,有望成为防治AD的先导化合物。

著录项

相似文献

  • 中文文献
  • 外文文献
  • 专利
代理获取

客服邮箱:kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备:11010802029741号 ICP备案号:京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有
  • 客服微信

  • 服务号