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广西长寿之乡老人饮食与代谢特征及其相关性研究

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第一章 绪论

1.1 广西巴马长寿现象

1.2 饮食对健康长寿的影响

1.3 代谢产物与健康长寿

1.4 代谢组学概述

1.4.1 代谢组学定义

1.4.2 代谢组学研究方法

1.4.3 模式识别技术在代谢组学中的应用

1.4.4 代谢组学研究的应用

1.5 人体元素水平与健康长寿

1.6 元素分析检测方法

1.7 立题意义与主要研究内容

1.7.1 立题背景及意义

1.7.2 主要研究内容

第二章 广西不同地域和年龄老人营养素摄入特征研究

2.1 引言

2.2 材料与方法

2.2.1 研究对象

2.2.2 膳食调查方法

2.2.3 营养素摄入量分析

2.2.4 统计分析

2.3 结果与讨论

2.3.1 营养素摄入量

2.3.2 模式识别分析

2.4 本章小结

第三章 广西巴马长寿区不同年龄老人尿液代谢组学研究

3.1 引言

3.2 材料与方法

3.2.1 研究对象

3.2.2 实验仪器及试剂

3.2.3 样品采集与预处理

3.2.4 基于LC-MS的代谢组学分析

3.2.5 数据处理与统计分析

3.3 结果与讨论

3.3.1 方法学验证结果

3.3.2 巴马百岁组老人和巴马60s组老人尿样分析典型LC-MS总离子流图

3.3.3 模式识别分析

3.3.4 巴马百岁组和巴马60s组之间差异代谢产物的挖掘及鉴定

3.3.5 差异代谢物的相关性网络

3.3.6 巴马百岁组的特征代谢物

3.4 本章小结

第四章 广西不同地域和年龄老人代谢产物特征及其与饮食相关性研究

4.1 引言

4.2 材料与方法

4.2.1 研究对象

4.2.2 实验仪器及试剂

4.2.3 样品采集与预处理

4.2.4 短链脂肪酸(SCFA)分析

4.2.5 苯酚及对甲酚分析

4.2.6 总胆汁酸、肌酐、尿酸、尿素分析

4.2.7 氨态氮分析

4.2.8 统计分析

4.3 结果与讨论

4.3.1 粪便短链脂肪酸分析

4.3.2 苯酚、对甲酚以及氨态氮分析

4.3.3 总胆汁酸、肌酐、尿酸、尿素分析

4.3.4 相关性分析

4.4 本章小结

第五章 广西不同地域和年龄老人指甲元素特征及其与饮食相关性分析

5.1 引言

5.2 材料与方法

5.2.1 研究对象

5.2.2 样品采集

5.2.4 实验方法

5.2.5 统计分析

5.3 结果与讨论

5.3.1 元素标准曲线回归方程的建立

5.3.2 方法定量限、准确度和精密度

5.3.3 指甲元素含量

5.3.4 饮用水中元素含量

5.3.5 相关性分析

5.4 本章小结

第六章 广西不同地域和年龄老人代谢产物与元素水平特征综合分析

6.1 引言

6.2 材料与方法

6.2.1 研究对象

6.2.2 实验方法

6.2.3 统计分析

6.3 结果分析

6.4 讨论

6.5 本章小结

第七章 结论与展望

7.1 结论

7.2 展望

7.3 创新点

参考文献

致谢

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摘要

广西巴马长寿现象凸显,具有突出的地方特色。本文通过探究巴马百岁老人、巴马80-99岁老人、巴马60-79岁老人以及南宁80-99老人的营养素摄入水平,利用非靶标代谢组学技术对巴马百岁老人和巴马60-79岁老人的尿液代谢轮廓进行分析,采用代谢物靶标分析技术对四组老人与饮食相关的代谢产物进行分析测定,利用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)对四组老人指甲元素水平进行分析,并进一步采用模式识别方法鉴别出与长寿区百岁老人密切相关的特征物质,此外分析代谢产物、指甲元素含量与营养素摄入量之间的相关关系,旨在揭示巴马百岁老人代谢特征和指甲元素特征,解析饮食与代谢之间的联系。主要结果如下。
  采用称重法并结合膳食史回顾法对四组老人进行膳食调查,分析比较营养素摄入量。结果表明,巴马百岁组和巴马80-99岁组的能量摄入量均显著低于南宁对照组(p<0.05),分别降低20%和19%。巴马百岁组、巴马80-99岁组和巴马60-79岁组的蛋白质、脂肪和胆固醇摄入量均显著低于南宁对照组(p<0.05)。而巴马百岁组的膳食纤维摄入量显著高于其他三组(p<0.05),是南宁对照组的1.7倍。巴马百岁组的维生素A摄入量也为最高,显著高于南宁对照组(p<0.05)。巴马百岁组的镁摄入量也显著高于巴马80-99岁组和南宁对照组(p<0.05)。通过偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)进行模式识别,结果表明,膳食纤维、维生素A、能量、脂肪、蛋白质、胆固醇这些营养素对组间差异的贡献相对较大,显示出巴马长寿区健康老人的饮食具有高膳食纤维、高维生素A以及低能量、低脂肪、低蛋白质、低胆固醇摄入量的特征。这种特定的营养素摄入模式,应该对长寿现象的形成具有重要而积极的影响作用。
  以巴马百岁老人和巴马60-79岁老人作为研究对象,采用LC-MS分析尿液代谢组,并利用多元统计分析手段主成分分析、PLS-DA、正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)进行模式识别。PLS-DA模型与OPLS-DA模型均表明,巴马百岁老人和巴马60-79岁老人的尿液代谢组显示出明显的分离,说明两组研究对象的尿液代谢组存在明显差异。正离子模式下鉴定出38个差异代谢物,负离子模式下鉴定出67个差异代谢物。进一步鉴别出18种与巴马百岁老人密切相关的特征代谢物,其中,5-羟基-L-色氨酸、咖啡酸、D-核糖、L-谷氨酰胺、L-蛋氨酸、焦谷氨酸、Lyso PE(0∶0/18∶1)、Lyso PE(0∶0/20∶4)、Lyso PE(0∶0/22∶4)、Lyso PE(0∶0/22∶5)、Lyso PE(0∶0/22∶6)、PS(20∶0/19∶0)、PS(22∶0/18∶3)、PS(22∶4/22∶4)、PS(O-18∶0/19∶0)在巴马百岁组中显著增加(p<0.01),而L-组氨酸、组胺、吲哚在巴马百岁组中显著减少(p<0.01)。变化倍数最高的四种特征代谢物依次为PS(O-18∶0/19∶0)、PS(22∶4/22∶4)、PS(20∶0/19∶0)、PS(22∶0/18∶3),均属于磷脂酰丝氨酸类物质,对于调节百岁老人神经系统功能、改善认知能力、延缓衰老、延长寿命应该具有积极影响。
  分析比较四组健康老人与饮食相关的代谢产物水平,包括短链脂肪酸(SCFA)(乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸)、总胆汁酸、苯酚、对甲酚、肌酐、尿酸、尿素、氨态氮。结果表明,巴马百岁组的粪便中短链脂肪酸和总胆汁酸含量显著增加(p<0.05),而尿液中苯酚、对甲酚、氨态氮、尿酸和尿素含量显著降低(p<0.05),这种特定的代谢模式,应该对长寿区百岁老人的健康长寿具有重要而积极的影响。与营养素摄入量的相关性分析结果显示,粪便丁酸含量与膳食纤维摄入量呈极显著正相关(r=0.896,p<0.01),相关系数最高。此外,乙酸、丙酸、异丁酸、戊酸、总SCFA及总胆汁酸含量均与膳食纤维摄入量呈极显著正相关(p<0.01),而尿液中苯酚含量与膳食纤维摄入量呈极显著负相关(p<0.01),另外,尿液中氨态氮、对甲酚、尿酸及尿素含量均与膳食纤维摄入量呈负相关关系。据此推断日常膳食中适量增加膳食纤维摄入量在一定程度上有利于人体的健康长寿。
  采用ICP-MS分析比较四组健康老人指甲元素含量。结果表明,巴马百岁组的Mn、Fe、Co、Zn、Se元素含量显著增高(p<0.05),而Pb含量显著降低(p<0.05),对长寿区百岁老人的健康长寿应该具有积极影响。指甲元素与饮用水中相应元素含量的相关性分析结果表明,Co、Sr、Ni元素均呈显著正相关(p<0.05)。因此可以判断饮用水是研究对象体内Co、Sr、Ni元素的重要来源。与营养素摄入量的相关性分析发现,指甲中的Mn元素含量与能量、蛋白质、脂肪、膳食纤维、胆固醇、维生素A、硫胺素、烟酸、钠、镁、锌、硒摄入量呈显著相关关系(p<0.05)。Fe元素含量与能量、维生素A、烟酸、钠摄入量呈显著相关关系(p<0.05)。Co元素含量与能量、膳食纤维、胆固醇、维生素A、硫胺素、烟酸、钠、镁摄入量呈显著相关关系(p<0.05)。Se元素含量与维生素E、磷摄入量呈显著正相关(p<0.05)。
  综合解析与饮食相关的代谢产物和人体元素水平对健康长寿的协同作用和综合影响,利用PLS-DA进行模式识别,建立巴马百岁组、巴马80-99岁组、南宁对照组三组研究对象的区分模型,探究不同地域、不同年龄的高龄老人在代谢产物和指甲元素水平方面的差异。结果表明,巴马百岁组、巴马80-99岁组和南宁对照组在代谢产物如短链脂肪酸、总胆汁酸、苯酚、对甲酚、肌酐、尿酸、尿素、氨态氮水平以及元素代谢模式方面存在显著差异。PLS-DA模型结合单维非参数秩和检验,鉴定出7种与长寿区百岁老人密切相关的特征物质,包括乙酸、总SCFA、Mn、Co、丙酸、丁酸、戊酸,其含量在巴马百岁组显著增加(p<0.05)。综合考虑乙酸、丙酸、丁酸、戊酸这些短链脂肪酸以及Mn、Co元素的生理功能及对人体健康长寿的有利影响,因此,认为广西巴马百岁老人这种特定的代谢模式,应该对长寿现象的形成具有重要而积极的影响。

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