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含噻唑烷-4-酮的免疫调节剂对巨噬细胞和NK细胞作用机制研究

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第1章 绪 论

1.1 序言

1.2 巨噬细胞研究进展

1.3 NK细胞研究进展

1.4免疫调节剂研究进展

1.5 本课题前期研究进展

1.6 研究目的及意义

参考文献

第2章 含噻唑烷-4-酮免疫调节剂对MФ功能的影响及机制研究

2.1 序言

2.2 材料与方法

2.3 结果

2.4 讨论

参考文献

第3章 含噻唑烷-4-酮免疫调节剂对NK功能的影响及机制研究

3.1 序言

3.2 材料与方法

3.3 结果

3.4 讨论

参考文献

第4章 结 论

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文

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摘要

目的:研究含噻唑烷-4-酮的糖类衍生小分子免疫调节剂(CH1a、CH2a、CH1b和CH2b)对固有免疫中MФ及NK细胞功能的影响;并探讨MФ及NK细胞活化可能的信号通路。
  方法:
  ①观察免疫调节剂在体外对巨噬细胞功能的影响,实验以无支原体感染的RAW264.7巨噬细胞系为研究对象。首先,利用CyQuant Cell Proliferation Assay观察免疫调节剂对LPS处理的RAW264.7巨噬细胞增殖的影响;其次,经免疫调节剂刺激的巨噬细胞吞噬FITC标记的Fluoresbrite YG polystyrene latex beads(0.75-mm Microspheres)检测其吞噬活性;再次,利用ELISA和RT-PCR方法分别测定培养上清中细胞因子水平(IL-6、IL-8和TNF-α)和细胞内mRNA(IL-6、IL-8和TNF-α)转录水平;此外,应用Griess Reagent System和流式细胞技术(FACS)分别对NO和活性氧(ROS)进行了测定,并利用Western blot检测iNOS的表达水平;最后,利用Western blot分别检测NF-κBp65和p38MAPK两条信号通路活化状态。
  ②观察免疫调节剂对NK细胞功能的影响,利用磁珠标记法(MACS)从健康人外周血中分离纯化NK细胞并对其纯度及活度进行测定。首先,CyQuant Cell Proliferation Assay检测免疫调节剂对正常和IL-15处理的NK细胞增殖的影响;其次,51Cr-release assay测定NK细胞杀伤活性;再次,ELISA检测细胞培养上清中IFN-γ和TNF-α的含量;最后,Western blot检测NK细胞杀伤相关的ERK1/2信号通路的活化状态。
  结果:
  1、与对照组及CH2a和CH1b相比,CH1a和CH2b可显著促进LPS活化的RAW264.7的增殖,且可显著提高巨噬细胞的吞噬活性并显著促进IL-6、IL-8和TNF-α的分泌及其mRNA的转录;提高NO和ROS的水平;促进IκB-α降解和NF-κBp65在核内的转位,并促进p38MAPK磷酸化。但是,未经LPS活化的巨噬细胞经CH1a、CH2a、CH1b或CH2b直接刺激后上述结果均不明显。
  2、CH1a、CH2a、CH1b和CH2b对正常和IL-15预处理的NK细胞无促进增殖效应;CH1b和CH2b可显著提高IFN-γ与TNF-α的分泌,并能明显促进ERK1/2的磷酸化,而这种效应经PD098059阻断后消失。
  结论:
  1、CH1a与CH2b能够进一步提高NF-κBp65和p38MAPK信号通路活化水平进而显著促进LPS活化的巨噬细胞功能。
  2、CH1b与CH2b能够通过活化ERK1/2信号通路而显著提高NK细胞细胞毒活性。

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