光度法研究有机小分子与蛋白质的相互作用机理

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本文研究了某些有机小分子茜素红，二溴邻甲酚磺酞及中药成份秦皮甲素、秦皮乙素与蛋白质的相互作用机理，发现有机小分子与蛋白质的结合符合Langmuir吸附聚集反应方程，其荧光猝灭为单一的静态猝灭过程。同时利用荧光法的高灵敏性，不经分离直接测定了中药秦皮中秦皮甲素的含量，共存物秦皮乙素不干扰测定，其具体内容如下：第一章综述了荧光法研究有机小分子与蛋白质的作用机理，以及能量转移效率E、临界能量转移距离R0、给体-受体间距离r、结合常数K、结合位点数n等常数的求法。第二章应用紫外光度法在pH=4.3的BR缓冲体系中，用微相吸附—光谱修正技术研究了茜素红(ARS)与牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)的结合反应。其吸附结合常数分别为：KBSA-ARS=3.950×104，KHSA-ARS=4.377×104。染料与蛋白的最大结合数分别为NARS：BSA=9：1，NARS:HAS=7：1。经光谱修正技术计算结合产物的实际摩尔吸光系数分别为εBSA-ARS(537nm)=2.517×104L·mol-1·cm-1，εHSA-ARS(519nm)=2.051×104L·mol-1·cm-1，检出限BSA为19mg·L-1；HSA为23mg·L-1。经探讨该结合反应机理符合Langmuir吸附聚集反应方程。第三章应用荧光光谱法研究了水溶液体系中，二溴邻甲酚磺酞与牛血清白蛋(BSA)、人血清白蛋白(HSA)之间的相互作用。实验表明：二溴邻甲酚磺酞对血清白蛋白的荧光有较强的猝灭作用，其荧光猝灭主要为静态猝灭，从荧光猝灭结果求得不同温度下染料与BSA的结合常数K，发现随反应温度上升K值下降。由反应焓变、熵变，确定二溴邻甲酚磺酞与血清白蛋白的结合主要是静电引力。依据非辐射能量转移机理，探讨了不同温度下二溴邻甲酚磺酞与血清白蛋白相互结合时，其给体—受体间距离和能量转移效率。进一步证实了该类反应为单一静态猝灭过程，且阐明了其猝灭机理是通过能量转移产生的。第四章用荧光光谱法研究了中药有效成份秦皮甲素、秦皮乙素与牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)之间的相互作用。结果表明：秦皮甲素、秦皮乙素对血清白蛋白的荧光有较强的猝灭作用，其荧光猝灭为单一的静态猝灭过程，其作用机制属能量转移机制。从荧光猝灭结果求得不同温度下反应的结合常数K，随反应温度上升K值下降。由反应焓变、熵变，确定它们间的结合主要是静电引力。依据非辐射能量转移机理，求出了其结合位置和能量转移效率。第五章简化药典测定秦皮中秦皮甲素的方法，不经薄层色谱分离直接对秦皮中秦皮甲素的含量进行测定。采用荧光技术，在456nm处测定秦皮提取液的荧光强度，调解仪器增益控制溶液荧光强度值，使秦皮中的秦皮乙素不干扰秦皮甲素的测定。秦皮甲素在1.0×10-10mol·L-1～1.6×10-6mol·L-1范围内有良好的线性，10-7mol·L-1数量级的回归方程为△F=5.1478+1.1849×108C，相关系数为0.9999，检出限为2.12×10-10mol·L-1(n=11)。对三批秦皮样品中秦皮甲素含量平行六次测定，相对标准偏差1.10％～2.53％，回收率96.95％～102.1％。本方法测定结果与药典方法测定结果一致，优点是不使用有机溶剂、简便、快速、准确、灵敏度高、共存的秦皮乙素不干扰测定。

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作者
孙艳梅;
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作者单位

河北大学;

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授予单位河北大学;
学科分析化学
授予学位硕士
导师姓名刘保生;
年度 2005
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类光化学分析法（光谱分析法）;中药化学;
关键词
光度法; 荧光法; 血清白蛋白; 作用机理;

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