声明
摘要
1 引言
1．1 基因组印记研究进展
1．1．1 基因组印记
1．1．2 印记基因的特征
1．1．3 印记基因主要的调控方式
1．2 DNA甲基化技术
1．2．1 DNA甲基化概述
1．2．2 DNA甲基化的检测方法
1．3 所研究的基因
1．3．1 Cdknlc／Kcnqlotl印记域的研究现状
1．3．2 Ascl2基因的研究现状
1．3．3 Tssc4基因的研究现状
1．3．4 Osbpl5基因的研究现状
1．4 研究内容及意义
2 材料与方法
2．1 实验材料
2．1．1 获取牛组织样本
2．1．2 实验药品
2．1．3 主要仪器
2．1．4 试剂配制
2．1．5 生物信息学网站和分析软件
2．2 实验方法
2．2．1 牛Ascl2基因生物信息学分析
2．2．2 32头牛基因组DNA的提取及检测
2．2．3 牛Ascl2、Tssc4和Osbpl5基因杂合子个体筛选
2．2．4 杂合子牛待测组织总RNA的提取及检测
2．2．5 反转录合成cDNA
2．2．6 基因组织特异性表达的RT-PCR分析
2．2．7 牛Ascl2、Tssc4和Osbpl5基因印记状态分析
2．2．8 Ascl2基因等位基因特异的甲基化状态分析
2．2．9 数据分析
3 结果与分析
3．1 牛Ascl2基因生物信息分析
3．2 牛肝脏、肺脏和肾脏基因组DNA的检测
3．3 筛选物Ascl2、Tssc4和Osbpl5基因杂合子个体
3．4 杂合子个体待测组织RNA的检测结果及RT-PCR反应
3．5 牛Ascl2基因
3．5．1 牛Ascl2基因的组织特异性表达
3．5．2 牛Ascl2基因的印记分析结果
3．6 牛Tssc4基因
3．6．1 牛Tssc4基因的组织特异性表达
3．6．2 牛Tssc4基因的印记分析结果
3．7 牛Osbpl5基因
3．7．1 牛Osbpl5基因的组织特异性表达
3．7．2 牛Osbpl5基因的印记分析结果
3．8 牛Ascl2基因启动子区甲基化状态分析
3．8．1 BSP-PCR引物设计
3．8．2 巢式PCR扩增
3．8．3 Ascl2等位基因特异的甲基化状态分析
4 讨论
4．1 牛Ascl2基因序列生物信息学分析
4．2 牛Ascl2、Tssc4和Osbpl5基因的组织特异性表达及印记状态分析
4．3 牛Ascl2基因启动子区DNA甲基化状态在调控印记中的作用
5 结论
参考文献
在读期间发表论文
作者简介
致谢
