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基于EC9706和HepG2细胞株的抗肿瘤活性筛选及KY4的体内抗肿瘤作用研究

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第1章 前言

1.1 抗肿瘤药物的研究进展

1.2 抗肿瘤药物筛选

1.2.1 体外筛选

1.2.2 体内筛选

1.3 抗癌药物分类

1.3.1 传统抗癌药物分类

1.3.2 从细胞敏感性分类

1.3.3 从分子水平分类

1.3.4 化疗的展望

1.4 筛选的化合物系列

1.4.1 冬凌草系列

1.4.2 吡唑烷酮系列

1.4.3 哒嗪酮、酞嗪酮系列

1.4.4 非甾体抗炎药系列

1.4.5 甾体系列

1.5 本课题立题背景和意义

第2章 基于EC9706和HEPG2细胞的抗肿瘤体外筛选

2.1 实验材料

2.1.1 细胞株

2.1.2 样品与试剂

2.1.3 仪器与设备

2.2 实验方法

2.2.1 培养用液的配制

2.2.2 样品的配制

2.2.3 HepG2和EC9706细胞培养

2.2.4 细胞传代方法

2.2.5 噻唑盐(MTT)比色法

2.2.6 流式细胞仪检测KY4对肿瘤细胞周期分布的影响

2.3 实验结果

2.3.1 细胞传代过程

2.3.2 所有化合物IC50值汇总

2.3.3 化合物对不同细胞株细胞毒作用的比较

2.3.4 细胞毒活性较好的化合物IC50值

2.3.5 化合物在不同浓度下的OD值和抑制率

2.3.6 化合物与顺铂在相同浓度下对细胞增殖影响的比较

2.3.7 KY4的体外筛选结果

2.4 讨论与小结

第3章 KY4的体内实验

3.1 实验材料

3.1.1 试剂与药品

3.1.2 实验动物

3.1.3 细胞系

3.1.4 实验仪器及设备

3.2 实验方法

3.2.1 受试药物

3.2.2 药物给药途径

3.2.3 动物肿瘤模型的制备

3.2.4 实验部分

3.2.5 统计学处理

3.3 实验结果

3.3.1 腹水瘤小鼠实验结果

3.3.2 实体瘤小鼠实验结果

3.4 讨论与小结

小结

参考文献

个人简历及发表的论文

致谢

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摘要

本文采用人癌细胞体外培养对五个系列共135个化合物的抗肿瘤作用进行了初步筛选,并进一步研究活性冬凌草衍生物KY4的体内抗肿瘤作用,为KY4的开发提供实验基础。
   基于食管鳞癌EC9706和肝癌HepG2细胞株对135个化合物进行了体外筛选,MTT法检测结果显示,77个化合物对细胞增殖呈现很好的抑制作用,其中9个化合物的IC50值小于10μg/mL,与细胞作用24 h即对细胞的体外增殖有显著的抑制作用,各实验组与正常对照组OD值的差异有统计学意义(P<0.05),且在一定的浓度范围内存在浓度依赖性。本结果提示此9个化合物具有良好的细胞毒作用。
   冬凌草衍生物KY4的肉瘤小鼠体内试验,以S180肉瘤建立了腹水瘤模型,KY4按15、10、5 mg/kg/d,氟尿嘧啶以20 mg/kg/d,对照组以15 mg/kg/d处理移植S180小鼠7天,结果剂量为5 mg/kg/d的实验组的抑制率达到了61.42%,接近于氟尿嘧啶的抑制率64.19%;以S180肉瘤建立了实体瘤模型,KY4按15、10、5 mg/kg/d,氟尿嘧啶以15 mg/kg/d,对照组以15 mg/kg/d处理移植S180小鼠7天,结果剂量为10 mg/kg/d的实验组的抑制率达到了62.04%,大于氟尿嘧啶的抑制率59.12%;但是腹水瘤和实体瘤实验结果的有效剂量稍有差异,可能是给药方式不同引起的。
   本文首次采用MTT法对135个化合物进行了体外筛选,筛选出一个冬凌草衍生物利用动物肿瘤移植模型进行体内实验,采用腹水瘤和实体瘤两种模型进行研究,首次证明新型冬凌草类衍生物KY4具有体外、体内抗肿瘤作用,体内外实验结果为今后KY4的开发提供了实验依据,为KY4的开发奠定了基础,但是其抑瘤机制还需要进一步研究。

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