津田芜菁花青素合成非依光型T-DNA突变体的构建及分析

摘要

1 绪论

1．1 花青素相关研究及应用

1．1．1 芜菁简介

1．1．2 花青素简介及生物合成途径

1．1．3 光对花青素合成的影响

1．2 T-DNA插入突变体库的建立

1．2．1 T-DNA插入在功能基因组学中的应用

1．2．2 农杆菌介导的T-DNA插入突变整合机制

1．2．3 T-DNA插入突变体的研究进展

1．3 Gateway技术构建植物表达载体

1．4 报告基因

1．5 非组培遗传转化方法

1．5．1 农杆菌介导的非组培遗传转化方法

1．5．2 DNA直接转化法

1．6 T-DNA插入侧翼序列获得的主要方法

1．6．1 质粒挽救(Plasmid rescue)

1．6．2 反向PCR(Inverse PCR)

1．6．3 热不对称交错式PCR(Thermal Asymmetric Interlaced PCR)

1．7 研究的目的及意义

1．8 研究的技术路线

2 GUS全长基因的克隆及表达载体的构建

2．1 引言

2．2 材料

2．2．1 试剂及载体

2．2．2 质粒及引物

2．2．3 菌株及培养基

2．3 研究方法

2．3．1 PCR获得GUS全长基因

2．3．2 Gateway技术构建T-DNA插入突变载体

2．4 结果与分析

2．4．1 GUS全长基因克隆

2．4．2 Gateway技术构建T-DNA插入突变载体

2．5 本章小结

2．5．1 讨论

2．5．2 结论

3 农杆菌介导的津田芜菁遗传转化

3．1 引言

3．2 材料

3．2．1 植物材料

3．2．2 试剂与质粒

3．2．3 试剂及培养基

3．3 研究方法

3．3．1 农杆菌转化

3．3．2 农杆菌介导的pH7WG2D，1-GUS的津田芜菁遗传转化的探索

3．3．3 农杆菌介导的pH7WG2D，1-GUS的津田芜菁非组培遗传转化

3．4 结果与分析

3．4．1 农杆菌的转化

3．4．2 津田芜菁遗传转化的探索

3．5 本章小结

3．5．1 讨论

3．5．2 结论

4 T-DNA插入突变体的分析

4．1 引言

4．2 材料

4．2．1 试剂及引物

4．2．2 菌株及培养基

4．3 研究方法

4．3．1 津田芜菁花青素合成突变体的表型分析

4．3．2 T2代转基因植株的分子生物学分析

4．3．3 T-DNA侧翼序列的扩增

4．4 结果与分析

4．4．1 津田芜菁花青素合成突变体的表型分析

4．4．2 T2代转基因植株的分子分析

4．4．3 T-DNA侧翼序列的扩增

4．5 本章小结

4．5．1 讨论

4．5．2 结论

讨论

结论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

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