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乙酸钠和丁酸钠对奶牛乳腺上皮细胞及腺泡乳脂合成相关基因表达的影响

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摘要

乳腺泌乳过程中重要功能基因的表达变化是调节乳腺生长、发育、分化以及乳汁合成、分泌、转运等重要生理过程的基础。因此,乳腺发育重要功能基因的研究对改善奶牛遗传性能、促进我国奶业发展具有积极作用。脂肪酸合酶(FAS)是一种多功能复合酶,是体内合成脂肪途径中的一个关键酶。乙酰辅酶A羧化酶(ACC)是脂肪酸合成途径的限速酶,它催化脂肪酸(FA)合成的第一步反应,在肝脏,脂肪和乳腺组织中,Acc显著地受到磷酸或去磷酸化作用调控,同时还受FA变构机制的影响。二酰基甘油转酰基酶1(DGAT1)是甘油三酯合成过程中的限速酶,与乳用动物乳脂肪含量高低有关。本实验旨通过乳脂肪前体物对乳脂肪合成基因表达的影响,揭示奶牛乳脂肪合成的基因调控机理。用体外培养方法获得乳腺腺泡模型,已成为一种有效简化乳腺发育和泌乳功能研究过程的基本方法和重要手段。
  本实验以乳腺上皮细胞和体外构建的奶牛乳腺腺泡为研究对象,采用荧光定量RT-PCR方法,探讨了外源添加乙酸钠和丁酸钠,对乳腺上皮细胞和乳腺腺泡模型中乳脂肪合成的关键酶Fas、Acc、Dgat1表达的影响,并采用半自动生化分析仪检测了添加乙酸钠和丁酸钠后培养体系中甘油三酯浓度的变化,确定了体外调控乳腺上皮细胞乳脂肪生物合成的最佳乙酸钠浓度为16mmol/L,最佳丁酸钠浓度为0.75mmol/L;通过转染对Srebp基因进行沉默试验,结果显示在二维细胞体系和三维腺泡体系中,干扰Srebp对3种重要的酶的表达呈现抑制作用,此研究为进一步研究泌乳基因调控提供了理论依据。

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