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摘要
缩略词(Abbreviation)
第一章文献综述
1．1禽多杀性巴氏杆菌病的危害与防控
1．1．1病原学
1．1．2禽多杀性巴氏杆菌病流行病学特点
1．1．3禽多杀性巴氏杆菌病的致病性
1．1．4禽多杀性巴氏杆菌病的临床症状及病理特征
1．2禽多杀性巴氏杆菌的耐药性
1．3禽多杀性巴氏杆菌毒力因子及免疫原性蛋白研究进展
1．3．1荚膜(Capsule)
1．3．2脂多糖(LPS)
1．3．3外膜蛋白(OMP)
1．3．4多杀性巴氏杆菌毒素(PMT)
1．3．5菌毛和粘附素
1．3．6铁代谢相关蛋白(IROMPs)
1．3．7唾液酸代谢(SAM)
1．4多杀性巴氏杆菌疫苗研究进展
1．4．1灭活疫苗
1．4．2弱毒活疫苗
1．4．3亚单位疫苗
1．4．4免疫复合物疫苗
1．4．5基因工程疫苗
1．5铁代谢及其对细菌生长的影响
1．5．1宿主阻止铁吸收的机制
1．5．2细菌对铁元素的吸收
1．6蛋白质组学在细菌学研究中的应用
1．6．1蛋白质组学简介
1．6．2蛋白质组学在病原微生物研究中的应用
第二章禽多杀性巴氏杆菌限铁培养及灭活疫苗研究
2．1研究的目的和意义
2．2实验材料
2．2．1菌株和试验动物
2．2．2主要试剂
2．3实验方法
2．3．1禽多杀性巴氏杆菌的培养
2．3．2疫苗制备
2．3．3疫苗质量检验
2．3．4疫苗免疫和攻毒保护试验
2．4结果
2．4．1限铁环境中Pm生长曲线
2．4．2疫苗的制备
2．4．3疫苗免疫后抗体监测
2．4．4攻毒试验结果
2．5讨论与小结
第三章禽多杀性巴氏杆菌免疫原性相关蛋白的发掘
3．1研究的目的和意义
3．2实验材料
3．2．1菌株，质粒和培养条件
3．2．2主要试剂耗材
3．2．3主要仪器
3．2．4培养基及抗生素的配置
3．3实验方法
3．3．1禽源巴氏杆菌分泌蛋白提取
3．3．2一向等点聚焦
3．3．3双向SDS-PAGE
3．3．4染色
3．3．5分泌蛋白质谱分析
3．3．6筛选蛋白的动物保护性实验
3．4实验结果
3．4．1二维电泳结果
3．4．2质谱分析结果
3．4．3筛选蛋白原核表达检测
3．4．4免疫与攻毒保护性检测
3．5讨论与小结
4．1研究的目的和意义
4．2材料
4．2．1菌株和质粒
4．2．2实验动物
4．2．3主要试剂
4．2．4主要溶液的配制
4．2．5主要仪器设备
4．3实验方法
4．3．1引物设计
4．3．2细菌的培养
4．3．3细菌的基因组的提取
4．3．4重组质粒pBC-SK-△aspA的构建
4．3．5重组质粒pBC-SK-△aspA-kan的构建
4．3．6多杀性巴氏杆菌C48-1电转化感受态细胞的制备
4．3．7自杀性质粒的电转化
4．3．9突变株的遗传稳定性
4．3．10突变株的生化特性
4．3．11不同营养条件下的生长曲线测定
4．3．12富马酸对缺失株生长速度的影响
4．3．13酚红显色实验
4．3．14酸性环境生存实验
4．3．15厌氧环境生存实验
4．3．16限铁环境生存实验
4．3．17 aspA基因转录是否受铁离子调控
4．3．18限铁环境下缺失株对铁离子的利用
4．3．20粘附与侵袭实验
4．3．21毒力实验
4．3．22疫苗免疫和攻毒保护试验
4．4实验结果
4．4．1 aspA基因左右同源臂以及Kana抗性基因的PCR扩增
4．4．2 aspA基上下游同源臂融合片段的构建
4．4．4重组质粒pBC-SK-△aspA-kan的酶切鉴定结果
4．4．6 △aspA∷kan突变株PCR鉴定结果
4．4．7遗传稳定性结果
4．4．8突变株的生化特性
4．4．9不同营养条件下的生长曲线测定结果
4．4．10富马酸对缺失株生长速度的影响
4．4．11酚红显色实验结果
4．4．12酸性环境生存实验结果
4．4．13厌氧环境生存实验结果
4．4．14限铁环境生存实验结果
4．4．15 aspA基因转录受铁离子调控
4．4．16限铁环境下缺失株对铁离子的摄取
4．4．17限铁环境下生物被膜的测定
4．4．18粘附与侵袭试验结果
4．4．19毒力试验结果
4．4．20免疫攻毒保护率检测
4．5讨论与小结
第五章结论
参考文献
Publications
致谢
