摘要
缩略词表
1文献综述
1.1关于植株再生
1.1.1器官发生途径
1.1.2体细胞胚发生途径
1.2月季植株再生的研究进展
1.2.1月季器官发生途径的植株再生
1.2.2月季体细胞胚发生途径的植株再生
1.3关于植物遗传转化
1.3.1农杆菌介导的遗传转化
1.4月季遗传转化的研究进展
1.5关于反义RNA技术
1.5.1反义RNA
1.5.2反义RNA技术的原理
1.5.3反义RNA技术的应用
1.6月季衰老与乙烯关系的研究进展
1.6.1月季自然衰老过程中乙烯合成的变化
1.6.2外源乙烯对月季开花和衰老的影响
1.6.3乙烯合成和作用抑制剂对月季衰老的影响
1.7本研究课题的目的和意义
2材料与方法
2.1月季微繁体系的建立
2.1.1植物材料
2.1.2培养方法
2.1.3培养条件
2.1.4试管苗的生根和移栽
2.2月季不定芽直接再生体系的建立
2.2.1基因型对植株再生的影响
2.2.2外植体对植株再生的影响
2.2.3叶位对植株再生的影响
2.2.4暗培养天数对植株再生的影响
2.2.5植物生长调节剂对植株再生的影响
2.3月季叶片间接再生体系的建立
2.3.1小叶外植体愈伤组织的诱导
2.3.2假珠芽的发生
2.3.3可继代增殖愈伤组织的获得
2.3.4愈伤组织的诱导分化
2.3.5悬浮体系的建立
2.3.6愈伤组织石蜡切片的制作
2.4月季‘萨蔓莎’根癌农杆菌遗传转化体系的建立
2.4.1植物材料
2.4.2月季‘萨蔓莎’小叶对潮霉素的敏感性分析
2.4.3月季‘萨蔓莎’愈伤组织对潮霉素的敏感性分析
2.4.4根癌农杆菌菌株及质粒
2.4.5根癌农杆菌的活化和工程菌液的制备
2.4.6侵染和共培养
2.4.7脱菌和选择培养
2.4.8转化条件的优化
2.4.9 GUS基因瞬间表达的检测
2.4.10试验培养基及各种试剂的配制
2.5 ACC氧化酶反义基因转化月季‘萨蔓莎’愈伤组织
2.5.1根癌农杆菌菌株及质粒
2.5.2转化和选择方法
2.6抗性愈伤组织的PCR检测
2.6.1愈伤组织DNA和质粒DNA的提取
2.6.2 PCR反应
3结果与分析
3.1月季微繁体系的建立
3.1.1腋芽的萌发
3.1.2试管苗的增殖
3.1.3试管苗的生根和移栽
3.2月季直接诱导不定芽和植株再生
3.2.1基因型对不定芽诱导的影响
3.2.2外植体对不定芽诱导的影响
3.2.3叶位对不定芽诱导的影响
3.2.5植物生长调节剂对植株再生的影响
3.3月季‘萨蔓莎'间接再生体系的建立
3.3.1小叶外植体愈伤组织的诱导
3.3.2假珠芽的发生
3.3.3可继代增殖愈伤组织的获得
3.3.4愈伤组织的诱导分化
3.3.5悬浮体系的初步建立
3.4月季‘萨蔓莎’叶片和愈伤组织的遗传转化
3.4.1叶片对潮霉素的敏感性分析
3.4.2愈伤组织对潮霉素的敏感性分析
3.4.3外植体对遗传转化的影响
3.4.4共培养培养基中盐浓度对愈伤组织遗传转化的影响
3.4.5侵染时间对愈伤组织遗传转化的影响
3.4.6共培养时光照条件对愈伤组织遗传转化的影响
3.4.7共培养培养基的pH值对愈伤组织遗传转化的影响
3.4.8共培养培养基中AS浓度对愈伤组织遗传转化的影响
3.4.9菌液浓度、共培养温度和时间对愈伤组织遗传转化的影响
3.4.10抗性愈伤组织的获得
3.4.11抗性愈伤组织的GUS检测和PCR检测
3.5含ACC氧化酶反义基因愈伤组织的获得
4问题与讨论
4.1月季‘萨蔓莎’两种转化受体系统的比较
4.1.1再生能力
4.1.2遗传稳定性
4.1.3外植体来源
4.1.4对选择抗生素的敏感性
4.1.5对农杆菌侵染的敏感性
4.2影响月季‘萨蔓莎’愈伤组织遗传转化的因素
4.3 GUS基因瞬间表达和稳定转化之间的关系
4.4关于本研究中转化系统的转化效率
4.5本研究的下一步工作
参考文献
附录
致 谢
